本发明提供一种畜禽用抗应激平衡调节剂组合物及其制备方法与应用，包括：步骤A：将所述聚乙烯亚胺、微量元素先与水杨酸钠在二维混合机上进行预混合；步骤B:加入牛磺酸、柠檬酸钠、水杨酸钠和电解质，连续混合，混合均匀；步骤C:再加入甘草酸铵、甘草苷，在三维混合机上连续混合，均匀后，分装即得。本发明制备的组合物属于非抗生素类制剂，解决了目前市场上抗应激类产品成分复杂、疗效不确切的问题以及产品溶解性差、在水中易析出、且与其他药物易发生配伍禁忌等缺点，起到调节体温、代谢平衡、免疫调节等作用，不会产生药物残留，有利于保障食品安全。