一种重组磷脂酶C的改性方法
Abstract:
本发明公开了一种重组磷脂酶C的改性方法,包括以下步骤:步骤一、修饰剂SS‑mPEG的制备:向烧瓶中加入2g mPEG,再加入4mL N,N‑二甲基甲酰胺,充分溶解;随后加入0.12g丁二酸酐,密封混匀,于100℃边搅拌边加热3h;待反应物冷却后于层析柜中逐滴加入10mL乙醚,将所得沉淀过滤干燥;干燥后的沉淀用二氯甲烷复溶,再用乙醚沉淀;所得沉淀产物真空干燥,在干燥器中保存备用;步骤二、修饰酶的制备:将SS‑mPEG和磷脂酶C按0~30的摩尔比例溶解于体积为10mL,pH为7.2,浓度为25mM的Tris‑HCl缓冲液中,在室温下震荡反应一定时间,用透析袋4℃透析过夜,所得的修饰酶液冷冻干燥后备用。本发明制得的修饰酶的热稳定性、pH稳定性及催化效率相比原酶均得到明显提高。
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