本发明属于分析化学领域，具体涉及一种分离测定盐酸氮卓斯汀丙酸氟替卡松复方鼻喷雾剂中两组分及有关物质的方法。本方法以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以流动相A和流动相B为流动相梯度洗脱进行固液分离，所述流动相A为六氟磷酸钾溶液，所述流动相B为有机溶剂；用高效液相色谱法分离测定盐酸氮卓斯汀丙酸氟替卡松复方鼻喷雾剂中两组分及有关物质，可同时实现盐酸氮卓斯汀丙酸氟替卡松两组分及11种有关物质的分离和检测，本方法弥补了现有技术的空缺，分离度好，专属性强，灵敏度高；且操作简单，具有简便、快速的优点，对于盐酸氮卓斯汀丙酸氟替卡松复方鼻喷雾剂药物的质量控制有重要意义。