本发明提出了测定样品中防腐剂和甜味剂的方法，该方法包括：将样品、正己烷、水及甲醇进行混合，并将所得到的混合液进行离心，得到具有上、下两层第一分离液的混合液，收集下层第一分离液；将甲醇、水和上层第一分离液进行混合，并将所得到的混合液进行离心，得到具有上、下两层第二分离液的混合液，收集下层第二分离液；合并下层第一分离液和下层第二分离液，并进行定容，得到待测液；以及利用液相色谱法对待测液进行检测，并基于检测结果确定样品中防腐剂和甜味剂含量，其中，样品为黄油或奶油，防腐剂为苯甲酸和山梨酸，甜味剂为安赛蜜和糖精钠。本发明方法可准确测定黄油或奶油中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸及糖精钠的含量，操作快速、简便。