本发明属于基因工程与分子生物技术应用领域，具体设计猪肌肉组织特异性高效表达的启动子及应用，以PK-15细胞DNA为模板扩增MCK基因启动子pMCK和2个MCK增强子eMCK，并将这些调控元件串联得到改造启动子eMCK-eMCK-pMCK,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。通过双荧光检测发现eMCK-eMCK-pMCK启动子活性不仅比pMCK高，而且其活性与SV40启动子活性相当。本发明涉及的肌肉特异性改造启动子可提高外源基因在猪肌肉中的表达水平，对基因工程的应用具有重要意义。