一种检测二甲戊灵的试纸条及其制备方法和应用，该试纸条包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；其特征是：反应膜上具有包被有二甲戊灵半抗原‑载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，结合物释放垫上喷涂有二甲戊灵单克隆抗体‑胶体金标记物。二甲戊灵半抗原是由N‑(1‑乙基丙基)‑3,4‑二甲基苯胺与4‑溴丁酸乙酯反应生成烃基化N‑(1‑乙基丙基)‑3,4‑二甲基苯胺，再与浓硝酸反应生成硝基烃化N‑(1‑乙基丙基)‑3,4‑二甲基苯胺，然后与KOH反应得到。本发明的优点在于：操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低、不受检测设备限制，可实现对大批量二甲戊灵样品进行快速检测和现场监控。