本发明涉及分离免疫球蛋白的方法，包括以下步骤：a)提供分离基质，其包含与多孔载体共价偶联的免疫球蛋白结合的碱稳定的蛋白A结构域的多聚体，b)使包含免疫球蛋白的液体样品与分离基质接触，c)用洗涤液洗涤所述分离基质，d)用洗脱液从分离基质洗脱免疫球蛋白，和e)用清洁液清洁分离基质，其中碱稳定的蛋白A结构域包含由SEQ ID NO 51或SEQ ID NO 52定义的葡萄球菌蛋白A(SpA)的亲本Fc‑结合结构域的突变体，其中SEQ ID NO 51或52的位置13和44处的氨基酸残基是天冬酰胺，和其中至少SEQ ID NO 51或52的位置3处的天冬酰胺残基已被突变为选自谷氨酸、赖氨酸、酪氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、丙氨酸、组氨酸和精氨酸的氨基酸。