本发明公开了一种同时测定环境水样中多种内分泌干扰物的方法，属于环境检测领域。它包括：(1)取水样，自然沉淀或离心后取上清液；使用固相萃取装置将上清液经过活化后的固相萃取小柱富集，富集后将萃取柱进行离心或真空干燥；(2)使用有机溶剂洗脱萃取柱，洗脱液浓缩后使用甲醇定容制成待测液；(3)建立目标污染物的定量方法；(4)采用高效液相色谱‑三重四级杆质谱测定水样中内分泌干扰物的浓度。本发明方法试剂消耗少，成本低，步骤少却能同时对水体中的多种内分泌干扰物进行定量分析，将关注的内分泌干扰物从传统的几种到十几种扩展到103种，大幅提高分析通量，拓展了应用范围，能够更好地识别环境水样中潜在高风险内分泌干扰物。