本发明公开了一种逆转肿瘤多药耐药性药物的药效评价方法。本发明通过检测健康组、阴性对照组、阳性对照组、待评价药物治疗组中尿液样本和/或血清样本的质谱，将待评价药物治疗组的样本质谱与阴性对照组的样本质谱进行比较以计算待评价药物治疗组的样本与阴性对照组样本中各代谢标志物特征碎片粒子峰的峰面积之差，由差值评价待评价药物的多药耐药性，差值越大即回调值越大，逆转肿瘤多药耐药性效果越好。通过实验验证本发明方法可准确评价逆转肿瘤多药耐药性药物的药效，同时本申请方法也可应用于肝癌细胞产生耐药性的早期诊断。