本发明公开了基于咪唑并[1,2‑a]吡啶近红外比率型pH荧光探针及其制备方法，以及该探针用于活细胞和大肠杆菌内极度酸性pH变化的测定。在惰性气体保护下，将4‑二甲基氨基肉桂醛或其衍生物，4‑氯苯胺和碳酸氢钠溶于甲醇，加热回流反应后；和2‑(4‑甲氧基苯基)‑7‑甲基咪唑并[1,2‑a]吡啶溶于N,N‑二甲基甲酰胺，以叔丁醇钾为碱性试剂，加热回流反应；浓缩后，经硅胶柱分离。该探针在极度酸性条件下其发射波长大于600nm处于近红外区并且呈现比率发射荧光特性，同时兼具对H+高度灵敏性、良好的选择性和大的Stokes位移等优点。