本发明公开了一种从动物胰脏中提取三种酶的工艺方法，以动物胰脏为原料，经组织绞碎，激活，浸泡，过滤，超滤，阴离子交换层析，疏水层析获得高纯度胰激肽原酶；阴离子交换层析过柱液经阳离子交换层析获得弹性酶；活化Sepharose、氨基己酸接臂、邻氨基苯甲醚偶联得O‑Anisidin‑ACA‑Sepharose亲和吸附剂对阳离子交换层析过柱液进行吸附获得高纯度糜蛋白酶。该方法实现胰激肽原酶，糜蛋白酶，弹性酶三酶联产且操作简便、产品纯度高、减少了资源浪费。O‑Anisidin‑ACA‑Sepharose介质的合成及使用降低了生产成本，提高了产品质量。