本发明涉及利用多表位串联蛋白检测猪口蹄疫O型抗体的化学发光检测试剂盒，属于生物技术领域，所述试剂盒包括包被有M2抗原的化学发光板、酶标二抗、血清稀释液、20×PBST洗涤液、阳性对照血清、阴性对照血清、化学发光底物A液和B液。所述M2抗原是能区分型的多表位串联蛋白，所述多表位串联蛋白是将O型口蹄疫3个拓扑型中不同分离株的鉴别型表位串联所得；所述鉴别型表位为G-H环的140-154位氨基酸。本发明所述的试剂盒灵敏度高、特异性好、广谱性好、与免疫A型和Asia 1型单价苗血清无交叉反应，并且操作简单，反应时间短，在口蹄疫O型抗体检测中具有很好的应用前景。