本发明公开了一种类I型胶原蛋白纤维的制备方法，属于基因工程技术领域。本发明以N和C端(GPP)n序列为基础，在中间插入连续的Gly-Xaa-Yaa三联体的胶原蛋白序列，形成三段式的嵌合胶原蛋白P-CL-P模式。通过N和C端的(GPP)n三股螺旋间的相互作用驱动自组装，形成具有周期性明暗相间条纹的带状纤维。本发明的方法可制备得到清洁来源的能自组装形成具有周期性明暗相间条纹的纤维，其结构与I型胶原蛋白类似，制备工艺简单，能够大规模生产成本低的胶原蛋白纤维，在生物材料领域有着广阔的应用前景。