本发明公开了一种全雄罗氏沼虾制种的方法，包括：步骤一，靶向DMRT1的siRNA设计和合成；步骤二，将得到的siRNA对虾苗进行转染，提取干扰后虾苗的RNA逆转录制备cDNA，利用实时荧光定量PCR检测RNA干扰后DMRT1和IAG基因的表达；步骤三，“假雌”亲本的检测与筛选；步骤四，全雄罗氏沼虾的培育与验证；步骤五，全雄罗氏沼虾母本“假雌”虾的传代；本发明能够解决全雄罗氏沼虾逆转率低，干扰过程死亡率高的问题；生产虾的子代中雄性比例高，养殖效果好。