本发明公开了如结构式I所示的多活性位点荧光探针。所述的探针对于Cys的荧光信号强度是Hcy荧光信号强度的80倍，是GSH的30倍，是SO2的260倍，可以高选择性地检测Cys，同时区分Hcy、GSH和SO2的干扰，其中对Hcy、GSH和SO2的检测限分别为0.21μM、0.35μM、0.15μM，而对Cys的检测限低至13nM；探针的细胞毒性弱，通过细胞成像试验，可以明显地观察到探针对于Cys、Hcy、GSH和SO2的荧光响应变化，可用于体内外生物硫醇和SO2的检测。