本发明属于免疫化学技术领域，具体涉及一株玉米赤霉烯酮单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用。该杂交瘤细胞株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期2021年05月13日，保藏编号为CGMCCNo.22338。本发明提供的细胞株分泌的单克隆抗体，对玉米赤霉烯酮具有较好的特异性和检测灵敏度(IC50值为0.057ng/mL)以及较宽的线性范围(0.01‑0.22ng/mL)，可实现玉米赤霉烯酮的检测，特别是对玉米、小麦、大麦、燕麦、稻谷及饲料中玉米赤霉烯酮残留量的检测，为食品中玉米赤霉烯酮残留的免疫检测提供了原料，具有实际应用价值。