本发明公开了一种芙蓉菊倍半萜化合物的含量测定方法，包括以下步骤：步骤(1)：供试品溶液的制备；步骤(2)：对照品溶液的制备；步骤(3)：精密吸取对照品及供试品溶液20μl，分别注入液相色谱仪，得到色谱图；步骤(4)：根据色谱图测量峰面积，将对照品溶液进行回归分析，制作标准曲线，根据标准曲线计算供试品溶液中各倍半萜化合物的含量。本发明提供了一种芙蓉菊倍半萜化合物的含量测定方法，应用该方法测定了芙蓉菊中草蒿素、木兰内酯和艾菊素3个倍半萜类成分的含量，该测定方法具有线性关系好、精密度和灵敏度高、重现性好、回收率高的特点，能够高效、简便、快速的对芙蓉菊倍半萜化合物的含量进行测定。