本发明属于基因编辑领域，涉及Cas12a蛋白，特别是指一种Mb2Cas12a‑RRVRR突变体蛋白及其制备方法和应用。本研究首次对16种Cas12a蛋白进行了评价，特别是它们在较低温度下的切割活性进行了评估。发现来自Moraxella bovoculi 57922菌株的Mb2Cas12a蛋白活性比其他蛋白更强。此外，本申请在Mb2Cas12a蛋白中引入了5个突变，从而创制Mb2Cas12a‑RRVRR变体蛋白，它具有更广泛的PAMs范围和更强的活性。综上所述，基于CRISPR/Mb2Cas12a‑RRVRR变体的新型检测工具增强了CRISPR技术的诊断能力，有潜力取代现有的Cas12a蛋白。