本发明提供一种天然没药、胶质没药配方颗粒薄层鉴别方法及其应用，包括：取待测样品，溶剂溶解，得到供试品溶液；所述待测样品为天然没药和胶质没药配方颗粒；取天然没药对照药材和胶质没药对照药材，分别溶剂溶解，得到对照药材溶液；将供试品溶液和对照药材溶液进行薄层色谱检测，薄层板为硅胶G薄层板；展开剂为体积比(8～10):(0.8～1.2):(0.8～1.2):(0.3～0.7)的环己烷‑乙酸乙酯‑冰乙酸‑0.1mol/L盐酸；紫外光灯下检视，供试品色谱中，在Rf内是否存在荧光斑点，作为鉴别点，区分天然没药配方颗粒和胶质没药配方颗粒。本发明通过观察薄层色谱图谱在指定比移值范围内是否存在斑点，作为鉴别点，用以快速、有效鉴别天然没药和胶质没药配方颗粒。