本发明属于纳米荧光材料技术领域，具体涉及一种铜掺杂线粒体靶向碳点、制备方法及其应用。该荧光碳点的制备方法包括如下步骤：步骤1)：将碳源、铜源、氮源依次加入硫酸溶液中，混匀得到混合溶液；碳源、铜源、氮源的质量比例为1～15：1～23：1～20；步骤2)：将混合溶液置于高温反应；步骤3)：将步骤2)得到的溶液离心，收集上层溶液过滤，透析，收集分子量800Da以上的溶液，冻干，得铜掺杂线粒体靶向碳点。本发明提供的荧光碳点的合成过程简单便捷，产量高，并且制备的荧光碳点可以靶向线粒体，同时可自发红色荧光，有助于进行小动物活体实验，对脑胶质瘤细胞有一定的杀伤作用。