本发明属于植物病毒检测技术领域，具体涉及一种多重PCR检测四种烟粉虱传瓜类病毒的方法与试剂盒。本发明要解决的技术问题是为同时检测四种烟粉虱传瓜类病毒提供一种新选择。本发明的技术方案是一种多重PCR检测四种烟粉虱传瓜类病毒的试剂盒，包括扩增ToLCNDV、SLCCNV、CYSDV和CCYV引物对。本发明还提供了多重PCR检测四种烟粉虱传瓜类病毒的方法，包括如下步骤：提取待测样本的RNA，反转录为cDNA，加入扩增ToLCNDV、SLCCNV、CYSDV和CCYV的引物对，扩增后对扩增产物进行检测。本发明建立了一次性检测出这四种病毒的体系，在保证准确率的同时，大大节省了时间，提高了检测效率。