本发明涉及植被根系呼吸测定技术领域，公开了一种植物根系呼吸的原位测定装置及测定方法，包括中心架和透明隔绝罩以及中央采集筒，所述透明隔绝罩呈镜像对称设置在所述中心架两侧，所述透明隔绝罩下端呈开口设置，用于对植物根系进行置入，所述中心架和透明隔绝罩之间共同开设有密封槽，所述密封槽内通过驱动组件活动安装有密封板，本申请测定过程中不需要移除植物根系，最大限度地维持了根际环境的自然状态，确保了测量数据的真实性，通过创建局部受控的小环境，有效隔离外界大气影响，使得所测得的数据能够准确反映植物根系自身的呼吸作用而不受其他因素干扰，本发明具有实用性强和测定精准的特点。