公开(公告)号：CN100513555C

公开(公告)日：2009-07-15

申请号：CN200610038917.6

申请日：2006-03-17

Applicant: 南京大学

Inventor： 杨柳燕 ,  王勤 ,  赵庆顺 ,  肖琳 ,  蒋丽娟 ,  尹大强 ,  任晶

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/52 ,  C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种转聚磷激酶基因的大肠杆菌的构建方法，该方法包括基因的克隆和载体的构建；克隆包括：提取大肠杆菌的总DNA；设计引物，扩增ppk基因；扩增出的目的基因重组到克隆载体pMD18-T中；转化大肠杆菌DH5α；构建包括：采用限制性内切酶BamH I和HindIII双酶切带有ppk目的基因的pMD18-T质粒和空表达载体pET-28a(+)；将目的基因通过T4连接酶定向连接到表达载体pET-28a(+)中，然后转化DH5α；利用PCR和双酶切的方法筛选鉴定出阳性重组子；提取出重组质粒pET28a-PPK，转化受体菌株BL21(DE3)中。本发明工艺简单，所得基因菌具有高效的去除磷的能力。

公开(公告)号：CN1876809A

公开(公告)日：2006-12-13

申请号：CN200610038917.6

申请日：2006-03-17

Applicant: 南京大学

Inventor： 杨柳燕 ,  王勤 ,  赵庆顺 ,  肖琳 ,  蒋丽娟 ,  尹大强 ,  任晶

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/52 ,  C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种转聚磷激酶基因的大肠杆菌的构建方法，该方法包括基因的克隆和载体的构建；克隆包括：提取大肠杆菌的总DNA；设计引物，扩增ppk基因；扩增出的目的基因重组到克隆载体pMD18－T中；转化大肠杆菌DH5α；构建包括：采用限制性内切酶BamHI和HindIII双酶切带有ppk目的基因的pMD18－T质粒和空表达载体pET－28a(+)；将目的基因通过T4连接酶定向连接到表达载体pET－28a(+)中，然后转化DH5α；利用PCR和双酶切的方法筛选鉴定出阳性重组子；提取出重组质粒pET28a－PPK，转化受体菌株BL21(DE3)中。本发明工艺简单，所得基因菌具有高效的去除磷的能力。