公开(公告)号：WO2013073774A1

公开(公告)日：2013-05-23

申请号：PCT/KR2012/007604

申请日：2012-09-21

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 엄숭호 ,  배선주

IPC: C12N15/09 ,  C12N15/63 ,  C12N15/12

CPC classification number: C12N15/10 ,  C12N15/63 ,  C12P21/00 ,  C12P21/02

Abstract: 본 발명은 X형 핵산 나노 구조체, DNA 단편을 포함하는 발현 플라스미드, 전사 및 번역 구성물질, 지질 막 성분을 포함하는, 세포 핵 모사 무세포 단백질 합성용 핵산 젤 매트릭스 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 무세포 단백질 합성용 핵산 젤 매트릭스는 X형 핵산 나노 구조체, DNA 단편을 포함하는 발현 플라스미드, 전사 및 번역 구성물질, 및 지질 막 성분을 포함하는 다형의(예. 타원형, 구형 혹은 사각형)의 젤 매트릭스로서, 세포 핵 내부의 염색체의 물리적 모형을 모사한 구조(타원형)로 인하여 작은 공간 안에 DNA, 전사 및 번역 구성인자 등이 밀집되어 있어 단백질 생산량을 최대화시킬 수 있을 뿐만 아니라, 젤 형태 안에서 DNA가 포함되어 있어 외부 인자로부터 보호할 수 있기 때문에 안정적으로 장기간 동안 고농도의 단백질을 생산하는데 사용될 수 있다.

Abstract translation: 本发明涉及含有X型核酸纳米结构的细胞核复制的无细胞蛋白质合成的核酸凝胶基质，含有DNA片段的表达质粒，转录和翻译成分以及脂质膜成分 ，及其制造方法。 根据本发明，用于细胞核复制的无细胞合成的核酸凝胶基质是含有X型核酸纳米结构的多晶型（例如椭圆形，球状或矩形）凝胶基质，表达式 含有DNA片段的质粒，转录和翻译成分以及脂质膜组分。 由于在细胞核中复制染色体的物理模型的（椭圆形）结构，所以将DNA和转录和翻译成分因子聚集在一个较小的空间中，以使产生的蛋白质的量最大化。 此外，由于DNA以凝胶形式包含，所以提供了保护免受外部因素的影响，使得DNA可用于产生长时间稳定的高密度蛋白质。

公开(公告)号：KR1020130054625A

公开(公告)日：2013-05-27

申请号：KR1020110120120

申请日：2011-11-17

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 엄숭호 ,  배선주

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/09 ,  C12N15/63 ,  C12N15/12

CPC classification number: C12N15/10 ,  C12N15/63 ,  C12P21/00 ,  C12P21/02 ,  C12Q1/6886 ,  C12N15/09 ,  C12Q1/683

Abstract: PURPOSE: A nucleic acid gel matrix for synthesizing nucleus mimic cell-free proteins, containing DNA, and translation and transcription factors, is provided to ensure similarity with natural genetic environment and to produce a large amount of proteins. CONSTITUTION: A method for preparing a nucleic acid gel matrix for synthesizing nucleus mimic cell-free proteins comprise: a step of depositing zinc oxide(ZnO) nanoparticles on a sapphire substrate and depositing gold on the surface thereof by an e-beam lithography or vacuum sputtering method; a step of treating the surface with 1 mM of an HDFT(heptadecafluoro-1-decanethiol) solution at room temperature for 15 minutes and preparing a ultra-hydrophobic surface; a step of binding single strand DNAs of sequence numbers 1, 2, 3, and 4 and preparing X-shaped nucleic acid nanostructure; a step of binding pIVEX plasmid and a DNA fragment using a restriction enzyme and T4 DNA ligase and preparing a recombinant plasmid; a step of binding X-shaped nucleic acid nanostrucrure, the recombinant plasmid, and transcription and translation factors using T4 DNA ligase and preparing a nucleic acid gel precursor; a step of placing the nucleic acid gel precursor on the ultra-hydrophobic surface, covering with PDMS template, and reacting at room temperature for 4 or more hours; and a step of reacting preparing nucleic acid matrix, a liposome prepared by membrane components(DOPC, DOTAP, Texas-red DHPE) at room temperature for 2 hours.

Abstract translation: 目的：提供用于合成核的模拟无细胞蛋白质的核酸凝胶基质，含有DNA和翻译和转录因子，以确保与自然遗传环境相似并产生大量蛋白质。 构成：制备用于合成核模拟无细胞蛋白的核酸凝胶基质的方法包括：在蓝宝石衬底上沉积氧化锌（ZnO）纳米颗粒并通过电子束光刻或真空在其表面上沉积金的步骤 溅射法 在室温下用1mM的HDFT（十七氟-1-癸硫醇）溶液处理表面15分钟并制备超疏水表面的步骤; 结合序列号1,2,3和4的单链DNA并制备X型核酸纳米结构的步骤; 使用限制酶和T4DNA连接酶结合pIVEX质粒和DNA片段并制备重组质粒的步骤; 使用T4 DNA连接酶结合X型核酸纳米结构，重组质粒和转录和翻译因子并制备核酸凝胶前体的步骤; 将核酸凝胶前体置于超疏水表面上，用PDMS模板覆盖，并在室温下反应4小时以上的步骤; 以及使制备核酸基质，通过膜组分（DOPC，DOTAP，德克萨斯 - 红DHPE）制备的脂质体在室温下反应2小时的步骤。

公开(公告)号：KR101343744B1

公开(公告)日：2013-12-19

申请号：KR1020110120120

申请日：2011-11-17

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 엄숭호 ,  배선주

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/09 ,  C12N15/63 ,  C12N15/12

CPC classification number: C12N15/10 ,  C12N15/63 ,  C12P21/00 ,  C12P21/02

Abstract: 본발명은 X형핵산나노구조체, DNA 단편을포함하는발현플라스미드, 전사및 번역구성물질, 지질막 성분을포함하는, 세포핵 모사무세포단백질합성용핵산젤 매트릭스및 이의제조방법에관한것이다. 본발명에따른무세포단백질합성용핵산젤 매트릭스는 X형핵산나노구조체, DNA 단편을포함하는발현플라스미드, 전사및 번역구성물질, 및지질막 성분을포함하는다형의(예. 타원형, 구형혹은사각형)의젤 매트릭스로서, 세포핵 내부의염색체의물리적모형을모사한구조(타원형)로인하여작은공간안에 DNA, 전사및 번역구성인자등이밀집되어있어단백질생산량을최대화시킬수 있을뿐만아니라, 젤형태안에서 DNA가포함되어있어외부인자로부터보호할수 있기때문에안정적으로장기간동안고농도의단백질을생산하는데사용될수 있다.