公开(公告)号：CN114276335B

公开(公告)日：2023-05-09

申请号：CN202111425846.6

申请日：2021-11-26

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 沈玉栋 ,  贺颖 ,  杨金易 ,  徐振林 ,  王弘 ,  肖治理 ,  雷红涛 ,  孙远明

IPC: C07D405/06 ,  C07K14/77 ,  C07K14/79 ,  C07K14/795 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53 ,  G01N33/577

Abstract: 本发明公开了一种苯醚甲环唑半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用。所述苯醚甲环唑半抗原的结构式如式I所示，通过在苯醚甲环唑的三唑上连接戊酸手臂制成，该半抗原未改变苯醚甲环唑骨架结构和原有侧链，与苯醚甲环唑结构高度一致，有利于高特异性抗体的诱导。基于该半抗原制备人工抗原，再以人工抗原免疫动物制备获得针对苯醚甲环唑的高质量单克隆抗体，基于该抗体所建立的检测苯醚甲环唑的免疫分析方法，其IC50为1.38ng/mL，最低检测限为0.32ng/mL，线性范围为0.49～3.90ng/mL，与其它结构与功能类似物交叉反应率均小于0.2％，特异性较高，可以有效检测食品中的苯醚甲环唑。表明本发明制备的人工抗原具有良好的免疫原性，可以用于制备苯醚甲环唑多克隆抗体、单链抗体和纳米抗体并建立相对应免疫分析法。

公开(公告)号：CN114292818B

公开(公告)日：2023-04-18

申请号：CN202111503863.7

申请日：2021-12-09

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 徐振林 ,  袁健城 ,  陈子键 ,  罗林 ,  沈玉栋 ,  雷红涛 ,  肖治理 ,  王弘

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/44 ,  G01N33/577 ,  G01N33/531 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种可同时检测甲基异柳磷和水胺硫磷的单克隆抗体及其应用，该单克隆抗体是由于2019年5月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC No：C 2019107的杂交瘤细胞株分泌，基于该单克隆抗体，建立了一种基于间接竞争酶联免疫法的检测甲基异柳磷和水胺硫磷的检测方法。本检测方法检测甲基异柳磷和水胺硫磷农药残留具有快速、特异性强、灵敏度高的特点，检测甲基异柳磷的IC50值为0.47ng/mL，检出限(IC10)为0.052ng/mL，线性范围为0.12～1.90ng/mL；检测水胺硫磷的IC50值为0.96ng/mL，检测限(IC10)为0.112ng/mL，线性范围为0.25～3.75ng/mL。

公开(公告)号：CN115611774A

公开(公告)日：2023-01-17

申请号：CN202211176478.0

申请日：2022-09-26

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 徐振林 ,  王俊锴 ,  叶秋雄 ,  江林峰 ,  梁俊发 ,  李斌 ,  沈玉栋

IPC: C07C255/39 ,  C07C253/30 ,  C07F9/53 ,  C07K14/765 ,  C07K14/79 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了甲氰菊酯半抗原、人工抗原和甲氰菊酯的检测方法，所述检测方法对甲氰菊酯具有良好的灵敏度，半抑制浓度为42.92ng/mL，最低检测限为15.11ng/mL。对常见菊酯类农药的交叉反应率均低于1％，具有良好的特异性，可有效的排除其他菊酯类药物的干扰。利用本发明的甲氰菊酯半抗原和人工抗原实现了快速准确检测相关样品中甲氰菊酯的目的。

公开(公告)号：CN114957478A

公开(公告)日：2022-08-30

申请号：CN202210603341.2

申请日：2022-05-30

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 沈玉栋 ,  张咏仪 ,  王弘 ,  徐振林 ,  杨金易 ,  孙远明

IPC: C07K16/44 ,  C12N15/13 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种抗肉桂酰胺类杀菌剂纳米抗体及其应用。本发明所述纳米抗体可单独或同时识别肉桂酰胺类杀菌剂，烯酰吗啉和氟吗啉，且具有良好的热稳定性、有机溶剂耐受性及优异的耐酸性，可用于烯酰吗啉和/或氟吗啉的检测或用于制备相应的检测产品。此外，本发明还提供了一种检测肉桂酰胺类杀菌剂的方法，对肉桂酰胺类杀菌剂烯酰吗啉和氟吗啉的检测灵敏度(IC50)分别为2.63和5.18ng/mL，线性范围分别为0.70～9.89ng/mL和0.95～28.22ng/mL，检测灵敏度高，准确性好，且操作简单耗时短，适于推广使用。

公开(公告)号：CN114778840A

公开(公告)日：2022-07-22

申请号：CN202210443102.5

申请日：2022-04-25

Applicant: 华南农业大学 ,  重庆市食品药品检验检测研究院

Inventor： 徐振林 ,  梁科 ,  许晶冰 ,  邓浩 ,  王炳志 ,  孙远明

IPC: G01N33/577 ,  G01N33/558

Abstract: 本发明公开了一种检测啶氧菌酯的试剂盒及其制备方法和应用，本发明制备的啶氧菌酯半抗原最大程度保留了啶氧菌酯的特征结构，使啶氧菌酯半抗原的免疫原性明显增强，得到的啶氧菌酯单克隆抗体灵敏度高，通过ELISA检测技术，对啶氧菌酯的最低检测限为0.5μg/L；啶氧菌酯半抗原的制备方法的反应操作简单，反应条件易控制，制备的啶氧菌酯半抗原的纯度和收率高。本发明制备的啶氧菌酯荧光定量免疫层析试纸条的检测灵敏度可达1μg/L，精密度高，在室温下能稳定保存一年以上，利于保存和运输，能够实现啶氧菌酯的快速定量检测。

公开(公告)号：CN114778820A

公开(公告)日：2022-07-22

申请号：CN202210435654.1

申请日：2022-04-24

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 沈玉栋 ,  李露 ,  杨金易 ,  徐振林 ,  王弘 ,  孙远明

IPC: G01N33/533 ,  G01N33/577 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种检测泰妙菌素的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用，以铕‑(Eu‑)荧光纳米粒子为示踪物标记泰妙菌素单克隆抗体，选择合适的荧光微球粒径，活化缓冲溶液的pH值，抗体稀释液和抗体用量，制备标记泰妙菌素单克隆抗体的时间分辨荧光微球探针，能提高时间分辨荧光微球与抗体的结合效率，促进探针释放，提高其检测灵敏度，减少抗原、抗体用量，适用于检测鸡蛋、鸡肉和猪肉等样品中的泰妙菌素。样品前处理方法简单，对鸡蛋、鸡肉和猪肉等样品中的泰妙菌素裸眼检测限为0.5ng/mL，定量检测限为0.07～0.13ng/mL，回收率为75.0％～101.8％，标准偏差为2.2％～29.5％。

公开(公告)号：CN114634550A

公开(公告)日：2022-06-17

申请号：CN202210198282.5

申请日：2022-03-01

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 徐振林 ,  李亚茹 ,  罗林 ,  韦柳娜 ,  雷红涛 ,  李向梅 ,  沈玉栋 ,  王弘

IPC: C07K7/06 ,  C12N15/11 ,  C12N7/01 ,  G01N33/577 ,  G01N33/58 ,  G01N33/53 ,  C12R1/92

Abstract: 本发明公开了一种河豚毒素的非诊断目的的检测方法，其用得到的氨基酸序列如SEQID NO:1、3、5、7、9或11所示模拟表位肽的噬菌体建立了灵敏、快速的竞争型酶联免疫分析法；该方法IC50为9.8ng/mL，检测范围为3.4～52.8ng/mL。与传统的基于半抗原的免疫分析方法灵敏度相比，本方法更加灵敏；该方法对其他海洋毒素的交叉反应良好。

公开(公告)号：CN114539170A

公开(公告)日：2022-05-27

申请号：CN202111679788.X

申请日：2021-12-31

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 杨金易 ,  沈玉栋 ,  贺颖 ,  王弘 ,  徐振林 ,  雷红涛 ,  孙远明

IPC: C07D241/44 ,  C07K14/77 ,  C07K14/79 ,  C07K14/795 ,  C07K16/06 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种用于同时检测金刚烷胺、喹乙醇、氯霉素的半抗原、人工抗原及其制备方法和应用。所述半抗原的结构式如式Ⅰ所示，是将金刚烷胺(AMD)、3‑甲基‑喹恶啉‑2‑羧酸(MQCA)和氯霉素胺(CAPA)3种药物骨架结构分别采用不同碳链长度的氨基酸和烷基二酸依次连接形成多簇串联线性半抗原，并将该半抗原偶联载体蛋白制备获得人工抗原。采用该人工抗原获得的多抗血清效价在8～32K之间，对半抗原抑制率在63～90％之间，表明本发明制备的多簇串联线性半抗原及其人工抗原具有良好的免疫原性，可以用于后续制备单克隆抗体、单链抗体和纳米抗体。

公开(公告)号：CN113307776B

公开(公告)日：2022-05-03

申请号：CN202110428475.0

申请日：2021-04-20

Applicant: 华南农业大学 ,  广州万联生物科技有限公司

Inventor： 徐振林 ,  梁植雯 ,  陈子键 ,  孙远明 ,  陈殿 ,  肖泽苗 ,  沈玉栋 ,  罗林

IPC: C07D235/32 ,  C07K14/765 ,  C07K14/79 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53 ,  G01N33/577

Abstract: 本发明公开了一种双特异性识别阿苯达唑和多菌灵的抗体制备和应用。本发明通过将半抗原偶联到载体蛋白上，制得两种人工抗原，将两个人工抗原分别用于动物免疫和作为包被原，通过细胞融合，制备能分泌抗阿苯达唑和/或多菌灵抗体的杂交瘤细胞，再利用包被原进一步建立一种基于间接竞争酶联免疫法的检测方法。该检测方法检测阿苯达唑和/或多菌灵具有特异性强、灵敏度高、快速简便等特点，其中，阿苯达唑IC50值为0.04ng/mL，线性范围为0.02～0.09ng/mL；多菌灵IC50值为3.35ng/mL，线性范围为0.95～11.77ng/mL。并且根据该检测方法既可以用于动物性食品中阿苯达唑的检测，也可以用于蔬菜中多菌灵的检测，实现多种用途。

公开(公告)号：CN114381472A

公开(公告)日：2022-04-22

申请号：CN202111661215.4

申请日：2021-12-30

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 王弘 ,  李迎雪 ,  刘飞 ,  徐振林

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/10 ,  C40B50/06 ,  C40B40/10 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种纳米抗体全合成文库及其构建方法。本发明的构建方法包括如下步骤：S1.选择一个固定的抗体恒定区序列作为骨架，统计分析已报道的纳米抗体序列，确定CDRs区氨基酸长度；S2.随后根据CDRs区氨基酸使用频率高低，确定CDR1和CDR2区氨基酸随机化数目，对CDR3区设计3种长度的氨基酸随机化数目，随后对3个CDR区均进行NNK随机化；S3.利用重叠延伸PCR获得完整DNA片段并克隆至载体，转化至大肠杆菌，构建纳米抗体全合成文库。本发明的构建方法可控性强，设计灵活，构建的纳米抗体全合成文库库容量大，多样性丰富，可用作不同抗原的筛选平台，丰富纳米抗体全合成文库资源。