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    一种棉花分子遗传连锁作图的方法
    11.
    发明公开
    一种棉花分子遗传连锁作图的方法 失效

    公开(公告)号：CN1541514A

    公开(公告)日：2004-11-03

    申请号：CN03119012.X

    申请日：2003-04-29

    Applicant: 华中农业大学

    Inventor： 张献龙 ,  林忠旭 ,  聂以春 ,  贺道华

    IPC: A01H1/02 ,  C12N15/10 ,  C12Q1/00

    Abstract: 本发明公开了一种利用SRAP分子标记进行棉花连锁遗传作图的方法。作图群体为海岛棉与陆地棉杂交产生F2单株。应用序列相关扩增多态性(SRAP)分子标记，PCR扩增检测所述群体的多态性并进行遗传作图，得到285个多态性条带，平均每个引物组合产生3.75个多态性条带，最多可产生13条多态性条带，比现有棉花分子遗传连锁图构建的其它标记的产率高。对285个标记用MAPMAKER构建连锁群，237个标记进入39个连锁群，每个连锁群有2～13个标记，总长3030.7 cM，覆盖整个棉花基因组的65.4％，标记间平均间距12.79cM。标记在整个连锁群中分布比较均匀，没有标记聚集在一起的现象。本发明还提出了具体的分子标记操作的步骤和电泳参数。

    一种鉴别深棕色棉花的分子标记
    14.
    发明授权
    一种鉴别深棕色棉花的分子标记 失效

    公开(公告)号：CN107365861B

    公开(公告)日：2020-06-26

    申请号：CN201710750264.2

    申请日：2017-08-28

    Applicant: 华中农业大学

    Inventor： 林忠旭 ,  张献龙 ,  温天旺 ,  吴迷

    IPC: C12Q1/6895 ,  C12N15/11

    Abstract: 本发明公开了一种鉴别深棕色棉花的分子标记，属于棉花分子育种技术领域，该分子标记为位于基因组TM‑1上的SSR182和SSR241，按如下方法实现：以深棕色棉花为父本，陆地棉邯郸208为母本，杂交得F1，使F1自交得到F2群体；以该F2群体单株作为棕色棉基因标记开发的材料，另收集材料构建关联分析群体，验证和筛选有效的分子标记；提取F2单株幼嫩叶片的DNA和收集材料关联群体的DNA；基于已经构建的棉花高密度遗传图谱和TM‑1基因组数据开发新的标记，进行极端单株的混池筛选与目标基因紧密连锁的分子标记，进一步在F2白棉单株中利用毛细管电泳仪进行基因分型，最后进行遗传距离计算和遗传作图；利用分子紧密连锁标记在收集材料关联群体中进行验证。

    一种miRNA分子标记的制备方法
    15.
    发明公开
    一种miRNA分子标记的制备方法 无效

    公开(公告)号：CN102816848A

    公开(公告)日：2012-12-12

    申请号：CN201210302878.1

    申请日：2012-08-24

    Applicant: 华中农业大学

    Inventor： 林忠旭 ,  张献龙 ,  陈学梅

    IPC: C12Q1/68

    Abstract: 本发明公开了一种miRNA分子标记的制备方法，其步骤是：1）用已知的128个SRAP引物与23个保守的pre-miRNA引物，利用两两组合的方式对鄂棉22和海岛棉品系3-79两个亲本进行多态性筛选；2）两个亲本杂交获得F1代，然后用鄂棉22做父本回交获得BC1群体；3）提取两个亲本，F1代和BC1群体的gDNA；4）用步骤1）中筛选出的多态性引物对3）中的gDNA进行多态性筛选；5）记录扩增产物信息；6）利用作图软件获得pre-miRNA的染色体定位。方法易行，操作简便，费用低廉，能高效快捷的发掘miRNA分子标记，而且由于SRAP引物设计的特点，所得的miRNA标记可能为功能基因，对今后miRNA的研究具有一定的参考价值。

    利用EST-SSR标记构建棉花纤维转录遗传连锁图谱的方法
    16.
    发明授权
    利用EST-SSR标记构建棉花纤维转录遗传连锁图谱的方法 失效

    公开(公告)号：CN101880714B

    公开(公告)日：2012-08-22

    申请号：CN201010196031.0

    申请日：2010-06-04

    Applicant: 华中农业大学

    Inventor： 张献龙 ,  林忠旭 ,  刘传祥

    IPC: C12Q1/68

    Abstract: 本发明属于棉花分子育种技术领域，具体涉及一种构建棉花纤维转录图谱的方法，步骤如下：以海岛棉Pima 3-79为父本，陆地棉鄂棉22为母本，杂交得F1；种植F1，使F1自交，得到F2；以该F2单株作为纤维转录图谱作图的起始材料；提取所述田间F2单株开花后5天的纤维的RNA，并反转录为cDNA，作为转录图谱的作图群体；利用报道的EST-SSR引物和自行设计的如序列表SEQ ID NO：1-90所示的引物分别对F2单株进行作图群体分析，用变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析；最后利用MAPMAKER/EXP.3.0作图软件分析数据，制作获得转录图谱。与现有方法相比本发明的方法简捷实用，QTL定位更加准确，便于棉花纤维发育相关基因的克隆。

    一种使单态性SSR标记转变为多态性标记的方法
    17.
    发明公开
    一种使单态性SSR标记转变为多态性标记的方法 无效

    公开(公告)号：CN102304507A

    公开(公告)日：2012-01-04

    申请号：CN201110186185.6

    申请日：2011-07-05

    Applicant: 华中农业大学

    Inventor： 林忠旭 ,  张献龙 ,  李夕梅

    IPC: C12N15/10

    Abstract: 本发明属于棉花分子育种技术领域，具体是一种使单态性SSR标记转变为多态性标记的方法。它包括以下步骤：(1)8％非变性聚丙烯酰胺凝胶的制备，丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为25-30∶1，10x TBE 100ml，然后用蒸馏水定容至1L；(2)常规电泳条件下单态性SSR引物对作图群体两亲本的PCR扩增，PCR反应体系(10ul)为：DNA模板25ng，1x Buffer，2.0mmol L-1 MgCl2，0.25mmolL-1 dNTPs，0.2μmol L-1 primer，0.8U Taq DNA聚合酶，不足部分用无菌的双蒸水补齐；(3)扩增产物在8％非变性聚丙烯酰胺凝胶上的电泳；(4)产生多态性的SSR引物。本发明的方法费用低廉、操作简捷、适用范围广泛，是有效使单态性SSR标记产生多态性的方法，极大地提高了SSR标记的利用效率。

    一种海岛棉EST－SSR标记的制备方法及应用
    18.
    发明公开
    一种海岛棉EST－SSR标记的制备方法及应用 无效

    公开(公告)号：CN101020924A

    公开(公告)日：2007-08-22

    申请号：CN200610166552.5

    申请日：2006-12-30

    Applicant: 华中农业大学

    Inventor： 张献龙 ,  林忠旭 ,  张艳欣 ,  涂礼莉 ,  聂以春

    IPC: C12Q1/68 ,  C40B40/06

    Abstract: 本发明属于棉花育种领域，涉及一种海岛棉EST－SSR引物序列的制备技术及应用，利用这些引物进行棉花遗传多样性的评价、分子遗传连锁构建和棉花重要性状的QTL定位。步骤包括：1)建立海岛棉品系Pima3－79纤维发育的cDNA文库，从单一序列中挑出占其中富含二、三、四、五或六核苷酸重复且长度≥10碱基的EST；2)设计SSR侧翼引物；3)从田间取基因型为AA、DD和AADD的棉种材料和亲本鄂棉22、Pima3－79以及BC1群体植株的嫩绿叶片提取其总DNA；4)用设计的SSR引物扩增步骤3)所示的材料和群体；5)计算每对引物的多态性信息含量，并对步骤3)所示的基因型棉种材料作聚类和主坐标分析；6)将BC1作图群体扩增的EST－SSR整合到种间遗传连锁图谱相应的连锁群上，并作棉花重要性状的QTL定位。结果显示，位于连锁群15的引物HAU033与籽指性状连锁，位于连锁群29的引物HAU100与单株铃数性状连锁；分别贡献了表型变异的7.41％和5.95％。

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