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公开(公告)号：CN112094781B
公开(公告)日：2021-08-24
申请号：CN202011031718.9
申请日：2020-09-27
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株解淀粉芽孢杆菌及其应用，属于生物技术领域。本发明提供了一株产胞外蛋白能力强的解淀粉芽孢杆菌WS；将此菌株接种至发酵培养基中发酵48h，即可使发酵上清中蛋白的表达量高达0.6mg/mL，比现有模式菌株B.amyloliquefaciens DSM7高0.2～0.3mg/mL；将以此菌株为宿主表达编码麦芽三糖淀粉酶的基因构建得到的重组菌接种至发酵培养基中发酵48h，即可使发酵上清中麦芽三糖淀粉酶的酶活高达155.28U/mL；将以此菌株为宿主表达编码普鲁兰酶的基因构建得到的重组菌接种至发酵培养基中发酵72h，即可使发酵上清中普鲁兰酶的酶活高达5.66U/mL。
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公开(公告)号：CN112553134A
公开(公告)日：2021-03-26
申请号：CN202011601201.9
申请日：2020-12-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了本发明涉及一种在枯草芽孢杆菌中表达α‑淀粉酶的方法，属于基因工程以及生物工程技术领域。本发明通过敲除枯草芽孢杆菌WS9基因组上的hrcA基因，获得了枯草芽孢杆菌基因工程WHS9；通过优化Sec分泌系统元件，发现共表达编码Sec分泌系统中膜转运通道的主要成分SecYEG的基因最有利于α‑淀粉酶在枯草芽孢杆菌WHS9中的重组表达；通过筛选到的信号肽平衡了α‑淀粉酶在枯草芽孢杆菌WHS9中的整个分泌过程，最终获得的枯草芽孢杆菌重组菌WHS9GSAB经摇瓶培养后胞外α‑淀粉酶活性为2835.1U/mL，经3‑L罐发酵培养后胞外α‑淀粉酶活性可高达35779.5U/mL。
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公开(公告)号：CN108102997A
公开(公告)日：2018-06-01
申请号：CN201810155533.5
申请日：2018-02-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种用于普鲁兰酶高效表达和高密度培养的枯草芽孢杆菌，属于生物工程技术领域。本发明采用CRISPR/Cas9基因编辑系统，依次敲除枯草芽孢杆菌WS5的nprB、bpr、mpr、vpr、epr和wprA这6个基因，分别得到WSH6、WSH7、WSH8、WSH9、WSH10和WSH11这6种枯草芽孢杆菌菌株。制备枯草芽孢杆菌WS5和上述六种菌感受态，转化普鲁兰酶表达质粒，得到七种普鲁兰酶重组菌，经过摇瓶筛选和3‑L罐上罐筛选。筛选得出宿主菌株为WSH9时产普鲁兰酶酶活最高，3‑L罐发酵78h，普鲁兰酶酶活可达2449.6U/mL，是目前报道的普鲁兰酶胞外最高水平。
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公开(公告)号：CN107058205A
公开(公告)日：2017-08-18
申请号：CN201710414186.9
申请日：2017-06-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产蔗糖磷酸化酶的重组枯草芽孢杆菌及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过人工合成SPase基因、设计引物、PCR获得Bifidobacterium adolescentis来源蔗糖磷酸化酶目的基因，构建重组质粒pBSMuL3‑SP，并转化至枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis(CCTCC M2016536)，得到重组枯草芽孢杆菌。以此枯草芽孢杆菌为菌种，发酵生产SPase。将重组蔗糖磷酸化酶应用于制备曲二糖具有比较好的效果。本发明以食品安全的枯草芽孢杆菌为表达宿主重组表达蔗糖磷酸化酶，产酶水平高，便于分离纯化，且发酵原料来源广泛，生产成本较低。
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公开(公告)号：CN106754466A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201611025858.9
申请日：2016-11-22
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12R1/125 , C07K14/32 , C12N9/1074 , C12N9/2417 , C12N9/54 , C12Y204/01019 , C12Y302/01001 , C12Y304/21062 , C12Y304/24
Abstract: 本发明公开了一种用于高效外源蛋白表达和高密度培养的枯草芽孢杆菌，属于生物工程技术领域。本发明采用筛选分离的方法从土壤中获得一株蛋白表达量高的枯草芽孢杆菌，并敲除其六个基因srfC、spoIIAC、amyE、nprE、aprE和bamA，得到B.subtilis WS5，保藏号为CCTCC M 2016536。以枯草芽孢杆菌WS5为表达宿主，构建β‑CGTase基因工程菌。对β‑CGTase基因工程菌进行3L发酵罐培养，在发酵过程中产生的泡沫明显减少，镜鉴未检测到芽孢的产生，培养过程中胞外淀粉酶和蛋白酶几乎没有，发酵培养70h时β‑CGTase酶活达到270U/ml，DCW达到70g/L。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN119899788A
公开(公告)日：2025-04-29
申请号：CN202510074360.4
申请日：2025-01-17
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/54 , C12N15/61 , C12P19/26 , C12N9/10 , C12N9/90 , C12N9/12 , C12N9/92 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种无外源添加乳糖生产乳酰‑N‑新四糖的基因工程菌株及其应用，属于基因工程技术领域。本发明通过逐步优化LNnT生物合成途径，获得了一个具有高LNnT产量和无需外源添加乳糖的工程菌株。本发明应用模块化途径工程将LNnT合成途径分为四个模块，并通过简单地改变每个模块的质粒拷贝数，系统地优化这四个途径之间的代谢平衡。此外，通过优化葡萄糖的转运途径，维持代谢通路平衡性，避免了细胞资源的浪费和中间体的过度积累，进一步平衡了LNnT生物合成途径的代谢通量。最终，该菌株产生了26.9g/L的LNnT。
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公开(公告)号：CN119842771A
公开(公告)日：2025-04-18
申请号：CN202510115677.8
申请日：2025-01-24
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/70 , C12N15/113 , C12P13/22 , C12P19/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑associated transposases基因编辑工具的构建与优化及其在大肠杆菌中的应用，属于合成生物学与基因工程领域。本发明在大肠杆菌中建立了高效的基因编辑系统，经过元件优化降低了MUSCULAR‑CAST系统对菌株的负担；通过消除自靶向作用可高效整合大片段(＞10k bp)目的基因表达框，并提高本基因编辑系统的可编程度。本发明将MUSCULAR‑CAST基因编辑系统用于构建生产3‑岩藻糖基乳糖、L‑色氨酸、2’‑岩藻糖基乳糖、新四糖的底盘菌株，可使底盘菌株相较于质粒表达产量相当或更高，且生长状况更为良好或转化率更高。
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公开(公告)号：CN118726439A
公开(公告)日：2024-10-01
申请号：CN202410765928.2
申请日：2024-06-14
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/75 , C12N1/21 , C12N15/67 , C12N9/26 , C12N9/38 , C12N9/42 , C12N15/31 , C12N15/54 , C12N15/55 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种构建重组蛋白表达能力提升的枯草芽孢杆菌底盘菌株的方法，属于酶程和微生物改造技术领域。本发明通过调控基因rodZ、lytS、hrcA、ypmS、ftsZ中的一个或多个基因，使枯草芽孢杆菌在摇瓶发酵生产的中温淀粉酶AmyS、β‑半乳糖苷酶、超高温淀粉酶、几丁质酶的表达量提高4.32倍、2.05倍、1.54倍、1.12倍。结合共表达PonA和发酵优化，在3‑L生物反应器高密度发酵中将AmyS的酶活提高至102,893U·mL‑1，是目前AmyS表达的最高水平。
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公开(公告)号：CN117343889A
公开(公告)日：2024-01-05
申请号：CN202311216056.6
申请日：2023-09-19
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N15/61 , C12N15/55 , C12N15/31 , C12N15/70 , C12P19/18 , C12P19/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种高乳酰‑N‑新四糖生成低乳酰‑N‑三糖残留的基因工程菌株及其应用，属于微生物基因工程领域。本发明通过阻断乳酰‑N‑新四糖合成竞争途径，引入β‑1,3‑N‑乙酰葡糖胺基转移酶基因lgtA和β‑1,4‑半乳糖基转移酶基因lgtB，并将乳酰‑N‑新四糖合成途径划分为3个模块，优化各模块的表达水平来系统地平衡各个模块的合成通量来提高乳酰‑N‑新四糖的合成。进一步，通过调节lgtB翻译起始强度对合成途径通量进行了微调。最后，乳酰‑N‑新四糖的产量在摇瓶培养中达到6.70g/L，在3升生物反应器中达到19.40g/L，同时乳酰‑N‑三糖II的残留量为1.79g/L，为乳酰‑N‑新四糖的工业化应用奠定了基础。
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公开(公告)号：CN112094781A
公开(公告)日：2020-12-18
申请号：CN202011031718.9
申请日：2020-09-27
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株解淀粉芽孢杆菌及其应用，属于生物技术领域。本发明提供了一株产胞外蛋白能力强的解淀粉芽孢杆菌WS；将此菌株接种至发酵培养基中发酵48h，即可使发酵上清中蛋白的表达量高达0.6mg/mL，比现有模式菌株B.amyloliquefaciens DSM7高0.2～0.3mg/mL；将以此菌株为宿主表达编码麦芽三糖淀粉酶的基因构建得到的重组菌接种至发酵培养基中发酵48h，即可使发酵上清中麦芽三糖淀粉酶的酶活高达155.28U/mL；将以此菌株为宿主表达编码普鲁兰酶的基因构建得到的重组菌接种至发酵培养基中发酵72h，即可使发酵上清中普鲁兰酶的酶活高达5.66U/mL。
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