公开(公告)号：CN116445528B

公开(公告)日：2024-08-09

申请号：CN202310401917.1

申请日：2023-04-14

Applicant: 扬州大学

Inventor： 陈振海 ,  潘朔楠 ,  牟春晓 ,  陈密 ,  包文斌

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/50 ,  C12N7/01 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开了重组猪流行性腹泻病毒感染性克隆的构建方法及其感染性克隆和应用，包括以下步骤：第一轮基因重组扩增打靶片段；电转化打靶片段得到阳性克隆；将得到的阳性克隆通过第二轮重组去掉酶切位点和抗性基因得到表达目的基因的PEDV感染性克隆。本发明建立了基于细菌人工染色体的PEDV反向遗传学系统，通过Red同源重组技术，在体外快速高效地编辑PEDV基因组，为研究病毒的分子生物学特性、致病机理以及开发基因工程疫苗提供有力的技术平台，该方法高效便捷、特异性强，为体外编辑PEDV基因组及其它病毒基因组提供了新的方法。

公开(公告)号：CN111607594B

公开(公告)日：2023-10-20

申请号：CN202010338637.7

申请日：2020-04-26

Applicant: 扬州大学

Inventor： 包文斌 ,  宗秋芳 ,  殷宗俊 ,  王海飞 ,  吴圣龙

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas9编辑技术的敲除猪IRF8基因的细胞系及其构建方法，该细胞系采用以下步骤制备：(1)靶位点设计及sgRNA序列的合成：根据猪IRF8基因CDS区5’端设计sgRNA向导序列；(2)载体构建：将正链sgRNA序列和负链sgRNA序列退火形成双链DNA；将双链DNA与线性化的pGK1.1载体连接获得阳性打靶载体；(3)细胞转染：将阳性打靶载体混合电转染靶细胞IPEC‑J2获得IRF8基因敲除的IPEC‑J2细胞。建立IRF8基因敲除的小肠上皮细胞系，可为深入揭示腹泻病原体致病机制、抗性基因挖掘与鉴定以及抗腹泻病转基因猪的培育和应用提供更直接有效的研究模型。

公开(公告)号：CN116678976A

公开(公告)日：2023-09-01

申请号：CN202310711113.1

申请日：2023-06-15

Applicant: 扬州大学

Inventor： 谢恺舟 ,  刘书余 ,  汤亚云 ,  庞茂达 ,  谢星 ,  郭亚文 ,  高鹏飞 ,  陈兰 ,  朱雅丽 ,  丁浩 ,  徐峻杰 ,  印伯星 ,  洪璐 ,  张涛 ,  张跟喜 ,  戴国俊 ,  赵振华 ,  王冉 ,  高玉时 ,  包文斌

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/06 ,  G01N30/14 ,  G01N30/72

Abstract: 本发明涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种鸡组织、猪肉、鸡蛋或牛奶及其制品中恩诺沙星和氧氟沙星残留的定量检测方法，包括以下步骤：鸡组织、猪肉或鸡蛋依次经过2％甲酸乙腈提取，乙腈饱和正己烷脱脂，Oasis PRiME HLB固相萃取柱净化，或将牛奶依次经过10％三氯乙酸‑乙腈(9:1，v:v)提取，乙腈饱和正己烷脱脂，经过Strata‑X固相萃取柱净化，洗脱液在氮气流下吹干浓缩；将浓缩干后的样品中加入甲醇复溶，复溶后加入三甲基硅烷基重氮甲烷，衍生反应后过滤，滤液采用GC‑MS/MS检测。该方法定性、定量更准确，准确度和灵敏度好，回收率高，重复性好。

公开(公告)号：CN111693639B

公开(公告)日：2022-11-18

申请号：CN202010534833.1

申请日：2020-06-12

Applicant: 扬州大学

Inventor： 谢恺舟 ,  刘楚君 ,  谢星 ,  庞茂达 ,  王波 ,  严祖浩 ,  王旭堂 ,  刁志祥 ,  张培杨 ,  郭亚文 ,  李洋静 ,  沈建新 ,  张跟喜 ,  张涛 ,  戴国俊 ,  王冉 ,  杨成根 ,  包文斌 ,  王宏胜

IPC: G01N30/88 ,  G01N30/06

Abstract: 本发明涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种检测禽组织、禽蛋或猪肉中青霉素G残留的确证分析方法，包括以下步骤：将禽组织、禽蛋或猪肉样品通过加速溶剂萃取技术提取，固相萃取净化，三甲基硅烷基重氮甲烷衍生，经GC‑MS/MS检测；所述禽组织为鸡肉、鸡肝、鸡肾、鹅肉或鸭肉；所述禽蛋为鸡蛋或鸭蛋。本方法分析效率更高、回收率、准确度和灵敏度高，重现性好，适合在批量样品分析中应用与推广。该方法能高效、准确的检测禽组织、禽蛋及猪肉中青霉素G残留，且满足中国农业农村部和欧盟兽药残留检测要求。

公开(公告)号：CN111707762B

公开(公告)日：2022-08-19

申请号：CN202010534814.9

申请日：2020-06-12

Applicant: 扬州大学

Inventor： 谢恺舟 ,  刘楚君 ,  庞茂达 ,  谢星 ,  王波 ,  严祖浩 ,  王旭堂 ,  刁志祥 ,  张培杨 ,  郭亚文 ,  李洋静 ,  沈建新 ,  张跟喜 ,  张涛 ,  戴国俊 ,  王冉 ,  杨成根 ,  包文斌 ,  王宏胜

IPC: G01N30/06

Abstract: 本发明涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种从禽组织、禽蛋或猪肉中提取青霉素G残留并衍生化的方法，使用加速溶剂萃取仪进行正己烷脱脂，提取禽组织、禽蛋或猪肉中的青霉素G残留，将收集的提取液经过HLB固相萃取柱净化，收集液经氮吹仪浓缩后复溶并与三甲基硅烷基重氮甲烷进行衍生化反应；该提取方法样品基质影响小、提取效率高、回收率高。

公开(公告)号：CN112899219A

公开(公告)日：2021-06-04

申请号：CN202011415326.2

申请日：2020-12-07

Applicant: 扬州大学

Inventor： 范海瑞 ,  包文斌 ,  吴圣龙 ,  吴正常 ,  王海飞

IPC: C12N5/075

Abstract: 本发明公开了一种小鼠腔前卵泡三维培养体系及其建立方法，提供了一种用于体外培养小鼠腔前卵泡的试剂组合，该试剂组合包含：藻酸盐溶液、CaCl2凝胶液、卵泡分离液(DM)、卵泡平衡液(MM)、卵泡酶解液(EM)、卵泡生长液(GM)、卵泡成熟液(MM1)和透明质酸酶。采用该试剂组合建立了一种小鼠腔前卵泡三维培养体系，该三维培养体系以藻酸盐凝胶为基质，以藻酸盐与Ca2+形成的凝胶滴为卵泡发育提供立体结构，再通过在不同的培养基质中进行培养，得到发育成熟的卵泡，进一步得到成熟的卵母细胞。

公开(公告)号：CN111693639A

公开(公告)日：2020-09-22

申请号：CN202010534833.1

申请日：2020-06-12

Applicant: 扬州大学

Inventor： 谢恺舟 ,  刘楚君 ,  谢星 ,  庞茂达 ,  王波 ,  严祖浩 ,  王旭堂 ,  刁志祥 ,  张培杨 ,  郭亚文 ,  李洋静 ,  沈建新 ,  张跟喜 ,  张涛 ,  戴国俊 ,  王冉 ,  杨成根 ,  包文斌 ,  王宏胜

IPC: G01N30/88 ,  G01N30/06

Abstract: 本发明涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种检测禽组织、禽蛋或猪肉中青霉素G残留的确证分析方法，包括以下步骤：将禽组织、禽蛋或猪肉样品通过加速溶剂萃取技术提取，固相萃取净化，三甲基硅烷基重氮甲烷衍生，经GC-MS/MS检测；所述禽组织为鸡肉、鸡肝、鸡肾、鹅肉或鸭肉；所述禽蛋为鸡蛋或鸭蛋。本方法分析效率更高、回收率、准确度和灵敏度高，重现性好，适合在批量样品分析中应用与推广。该方法能高效、准确的检测禽组织、禽蛋及猪肉中青霉素G残留，且满足中国农业农村部和欧盟兽药残留检测要求。

公开(公告)号：CN110004145A

公开(公告)日：2019-07-12

申请号：CN201910263714.4

申请日：2019-04-02

Applicant: 扬州大学

Inventor： 包文斌 ,  王诗琴 ,  戴开宇 ,  王海飞 ,  吴圣龙

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N15/12 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开一种sgRNA、双链DNA、载体和细胞。本发明还公开了一种KLF4基因的敲除方法。本发明首次利用CRISPR/Cas9技术构建KLF4敲除的IPEC-J2细胞系，可作为猪疾病研究的理想细胞模型；利用CRISPR/Cas9技术进行基因敲除，比基因沉默、干扰等技术手段可更有效地敲除KLF4基因，更有助于KLF4蛋白的功能研究；基因测序检测表明KLF4基因序列被敲除，可造成KLF4基因功能的缺失，是较为理想的KLF4基因敲除的IPEC-J2细胞模型。本发明的敲除方法简便，打靶效率高。

公开(公告)号：CN108220338A

公开(公告)日：2018-06-29

申请号：CN201711170105.1

申请日：2017-11-22

Applicant: 扬州大学

Inventor： 包文斌 ,  戴开宇 ,  王诗琴 ,  王海飞 ,  吴圣龙

IPC: C12N15/90 ,  C12N9/22 ,  C12N15/66

Abstract: 一种APN基因敲除的IPEC_J2细胞的构建方法，属于基因工程技术领域，本发明采用CRISPR/Cas9技术敲除IPEC_J2细胞系基因组中APN基因序列，建立的APN基因敲除的小肠上皮细胞可为深入揭示腹泻病原体致病机制以及抗腹泻病转基因猪的培育和应用提供更直接有效的研究模型。

公开(公告)号：CN103173531A

公开(公告)日：2013-06-26

申请号：CN201210369867.5

申请日：2012-09-27

Applicant: 扬州大学

Inventor： 包文斌 ,  吴圣龙 ,  潘章源 ,  吴正常 ,  霍永久 ,  朱国强 ,  黄小国 ,  黄雪根 ,  陈洪青 ,  孙寿永

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明涉及筛选一种猪一般抗病力BPI基因第4和10外显子变异位点组合基因型的遗传标记，属于猪遗传育种及分子标记辅助选择技术领域。本发明方法包括待测样品的猪基因组DNA的提取及其PCR扩增，外显子4的PCR产物经SSCP分析和外显子10的PCR产物经限制性内切酶HpaII的酶切，当待测猪个体基因型为CDAB型，则为一般抗病力强的个体。本发明为猪抗病育种工作的分子标记辅助选择提供一个更加高效准确的分子遗传标记，为提高仔猪一般抗病力和免疫应答能力提供了一种有效的分子标记育种手段，本发明的检测方法操作简单，费用较为低廉，准确度高，并可实现自动化的直接检测，本发明将在猪的育种中发挥巨大作用。