公开(公告)号：CN110004145B

公开(公告)日：2023-01-31

申请号：CN201910263714.4

申请日：2019-04-02

Applicant: 扬州大学

Inventor： 包文斌 ,  王诗琴 ,  戴开宇 ,  王海飞 ,  吴圣龙

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N15/12 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开一种sgRNA、双链DNA、载体和细胞。本发明还公开了一种KLF4基因的敲除方法。本发明首次利用CRISPR/Cas9技术构建KLF4敲除的IPEC‑J2细胞系，可作为猪疾病研究的理想细胞模型；利用CRISPR/Cas9技术进行基因敲除，比基因沉默、干扰等技术手段可更有效地敲除KLF4基因，更有助于KLF4蛋白的功能研究；基因测序检测表明KLF4基因序列被敲除，可造成KLF4基因功能的缺失，是较为理想的KLF4基因敲除的IPEC‑J2细胞模型。本发明的敲除方法简便，打靶效率高。

公开(公告)号：CN115227809A

公开(公告)日：2022-10-25

申请号：CN202210869266.4

申请日：2022-07-21

Applicant: 扬州大学

Inventor： 蔡德敏 ,  胡平 ,  刘好雨 ,  李铠圻 ,  李照见 ,  李艳伟 ,  包文斌 ,  刘娅娅 ,  王乙婷

IPC: A61K38/40 ,  A61K9/08 ,  A61K47/02 ,  A61P39/02 ,  A61P31/04 ,  A61P1/00

Abstract: 本发明公开了一种乳铁蛋白制备的防治霉菌毒素中毒药物及其应用，通过从小鼠体内(肠道)方面研究，在小鼠饮食中添加呕吐毒素模拟小鼠采食含有霉菌毒素的饲料，并给小鼠灌胃含有固定浓度的乳铁蛋白溶液，能够降低呕吐毒素造成的炎症因子的表达，同时可以增强空肠紧密连接蛋白的表达，从而缓解呕吐毒素对肠道功能的损伤。此外，乳铁蛋白还可以调控呕吐毒素处理小鼠的结肠微生物群并改善肠道微生物代谢，并通过乳铁蛋白与呕吐毒素之间的交互作用，促进小肠绒毛生长，加强肠道对营养物质的吸收能力。

公开(公告)号：CN115058418A

公开(公告)日：2022-09-16

申请号：CN202210012531.7

申请日：2022-01-06

Applicant: 扬州大学

Inventor： 任战士 ,  范海瑞 ,  吴圣龙 ,  吴正常 ,  包文斌

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/89 ,  C12N15/54 ,  A01K67/027 ,  C12Q1/6888 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11 ,  A61K49/00

Abstract: 本发明公开了一种构建Sec1基因敲除小鼠模型的方法，属于生物技术领域。采用Cas9/sg RNA注射受精卵的方法构建Sec1基因大片段敲除的小鼠模型，鉴定出野生型小鼠、杂合型小鼠和纯合型小鼠并对其进行表型分析、病理学分析、敲除前后对个体的影响和对睾丸发育、生精能力以及精子品质的影响的测定，以及Sec1基因本身的功能和分子机制分析，以期为该基因相关数据的补充和对个体功能的影响的数据探究提供了新的依据。

公开(公告)号：CN113740450A

公开(公告)日：2021-12-03

申请号：CN202110883585.6

申请日：2021-08-03

Applicant: 扬州大学

Inventor： 谢恺舟 ,  贺兆源 ,  姜军华 ,  王旭堂 ,  谢星 ,  庞茂达 ,  王波 ,  卢阳 ,  郭亚文 ,  陈兰 ,  陈晋元 ,  张跟喜 ,  张涛 ,  戴国俊 ,  王冉 ,  杨成根 ,  包文斌 ,  高玉时

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/06 ,  G01N30/14 ,  G01N30/72 ,  G01N30/86 ,  G01N30/88

Abstract: 本发明涉及兽药残留检测领域，涉及一种禽肉、猪肉或禽蛋中替米考星残留的定量检测方法，将禽肉、猪肉或禽蛋依次经过乙腈提取，正己烷脱脂，提取液经过HLB固相萃取柱净化，洗脱液经氮气吹干浓缩；在浓缩干后的样品中加入吡啶和乙酸酐，衍生反应后过滤后，滤液采用GC‑MS/MS检测。本发明采用液‑液萃取、固相萃取和凝胶色谱相结合的提取方法所得到的衍生产物的峰型良好，干扰杂质峰少，而且样品衍生产物的响应值高。

公开(公告)号：CN113106093A

公开(公告)日：2021-07-13

申请号：CN202110361953.0

申请日：2021-04-02

Applicant: 扬州大学

Inventor： 吴正常 ,  范海瑞 ,  靳健 ,  吴圣龙 ,  包文斌

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/6888 ,  G01N33/573 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体公开了FUT3基因作为靶点在提高猪对大肠杆菌抗性中的应用。本发明研究发现FUT3基因表达水平与大肠杆菌抗性密切相关。本研究从mRNA、蛋白质以及细胞水平上系统探讨了FUT3基因在仔猪抗F18大肠杆菌感染过程中发挥的重要作用，以期确定其可以作为细菌性腹泻重要的抗性候选功能基因，同时也将为之后在生猪生产中开展仔猪抗大肠杆菌腹泻病的分子选育提供科学根据。

公开(公告)号：CN112553200A

公开(公告)日：2021-03-26

申请号：CN202011414852.7

申请日：2020-12-07

Applicant: 扬州大学

Inventor： 包文斌 ,  徐亚菲 ,  吴圣龙 ,  王海飞 ,  吴正常

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/54 ,  C12N5/10 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种用于敲除猪UGT2C1基因的打靶载体制备方法及其应用，该方法包括以下步骤：(1)根据猪UGT2C1基因设计sgRNA向导序列；(2)将正链sgRNA序列和负链sgRNA序列退火形成双链DNA；将双链DNA与线性化的pGK1.1载体连接获得阳性打靶载体；(3)将阳性打靶载体混合电转染靶细胞IPEC‑J2获得UGT2C1基因敲除的IPEC‑J2细胞。本发明采用CRISPR/Cas9技术敲除IPEC‑J2细胞系基因组中UGT2C1基因序列，建立的UGT2C1基因敲除的IPEC‑J2细胞可为深入揭示UGT2C1基因在疾病抗性中的作用机制及其在猪抗病育种中的应用提供更直接有效的研究模型。

公开(公告)号：CN112011482A

公开(公告)日：2020-12-01

申请号：CN202010807418.9

申请日：2020-08-12

Applicant: 扬州大学

Inventor： 王海飞 ,  周雅静 ,  包文斌 ,  齐晓艺 ,  顾学珠 ,  吴圣龙

IPC: C12N1/20 ,  C12R1/225

Abstract: 本发明公开了一种猪源罗伊氏乳杆菌的改良培养方法，该方法为将猪源罗伊氏乳杆菌接种于MRS培养基进行培养，培养条件为：培养温度37～43℃,转速0～120r/min，无氧且供二氧化碳，培养36～48h。本发明对猪源罗伊氏杆菌的培养条件进行了优化改良；本发明对培养时间、温度、氧气含量、转速、接种量多个环境条件进行优化改良，制定的培养方法可在体外对猪源罗伊氏杆菌进行高效培养。

公开(公告)号：CN111607594A

公开(公告)日：2020-09-01

申请号：CN202010338637.7

申请日：2020-04-26

Applicant: 扬州大学

Inventor： 包文斌 ,  宗秋芳 ,  殷宗俊 ,  王海飞 ,  吴圣龙

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR-Cas9编辑技术的敲除猪IRF8基因的细胞系及其构建方法，该细胞系采用以下步骤制备：(1)靶位点设计及sgRNA序列的合成：根据猪IRF8基因CDS区5’端设计sgRNA向导序列；(2)载体构建：将正链sgRNA序列和负链sgRNA序列退火形成双链DNA；将双链DNA与线性化的pGK1.1载体连接获得阳性打靶载体；(3)细胞转染：将阳性打靶载体混合电转染靶细胞IPEC-J2获得IRF8基因敲除的IPEC-J2细胞。建立IRF8基因敲除的小肠上皮细胞系，可为深入揭示腹泻病原体致病机制、抗性基因挖掘与鉴定以及抗腹泻病转基因猪的培育和应用提供更直接有效的研究模型。

公开(公告)号：CN106480174B

公开(公告)日：2019-04-16

申请号：CN201610825036.2

申请日：2016-09-14

Applicant: 扬州大学

Inventor： 包文斌 ,  戴超辉 ,  吴圣龙 ,  吴森 ,  吴嘉韵 ,  黄小国

IPC: C12Q1/6888

Abstract: 本发明公开了一种用于猪抗病育种的遗传分子标记方法和应用。本发明是用大白猪FUT2基因转录起始密码子‑84bp多态位点作为抗病育种的分子标记方法与应用。检测该分子标记的方法包括待测样品的猪基因组DNA的提取及FUT2基因转录起始密码子上游序列的PCR扩增，转录起始密码子上游序列的PCR扩增产物经SSCP分析，当待测猪个体基因型为TT型(出现3条带中的第2和第3条带)，则为抗病育种的有利个体。本发明为从遗传素质上永久性地提高大白猪断奶仔猪大肠杆菌抗性和部分经济性状提供了有效的分子标记。用该遗传标记对大白猪种猪选育时进行标记辅助选择，开展抗病育种，可以提高断奶仔猪抗大肠杆菌侵染的能力，从根本上降低腹泻病的发病率，同时可以提高种猪的初生仔猪数和断奶仔猪数。

公开(公告)号：CN106282368A

公开(公告)日：2017-01-04

申请号：CN201610825347.9

申请日：2016-09-14

Applicant: 扬州大学

Inventor： 包文斌 ,  戴超辉 ,  吴圣龙 ,  孙丽 ,  杨建生 ,  姚建明

IPC: C12Q1/68

CPC classification number: C12Q1/6888 ,  C12Q2600/124 ,  C12Q2600/156 ,  C12Q2600/178

Abstract: 本发明公开了一种用于中国地方猪品种大肠杆菌抗性的分子标记方法与应用。是用miRNA-215前体序列中的AT插入突变作为中国地方猪品种大肠杆菌抗性的分子标记及其检测方法与应用，检测该分子标记的方法包括待测样品的猪基因组DNA的提取及整个miRNA-215前体序列的PCR扩增，miRNA-215前体序列的PCR经SSCP分析，当待测猪个体基因型为BB型(出现4条带中间的第2和第3这2条带，在miR-215前体序列6bp处存在2个碱基(AT)的插入突变)，则为大肠杆菌抗性强的个体。本发明为中国地方猪品种大肠杆菌性腹泻抗病育种工作的分子标记辅助选择，为提高仔猪腹泻抗病力提供了一种有效的分子标记育种手段。从根本上降低腹泻病的发病率。