木霉菌产孢培养基及产孢方法

    公开(公告)号:CN102660493B

    公开(公告)日:2013-11-20

    申请号:CN201210106705.2

    申请日:2012-04-12

    Abstract: 本发明公开了一种木霉菌产孢培养基及产孢方法。该木霉菌产孢培养基由果糖、木糖和一种基本培养基(酵母提取物、酒石酸铵、硝酸铵、磷酸二氢钾、七水合硫酸镁、氯化钠、二水合氯化钙、七水合硫酸亚铁、乙二胺四乙酸二钠和水)组成。分别以果糖和木糖为碳源,以酒石酸铵和酵母提取物为氮源;加入的无机盐具有构成微生物细胞的组成成分,并具有调节酶活性及细胞的渗透压、氢离子浓度和氧化还原电位等功能;其中的磷酸氢盐调节培养基的酸碱度,维持该菌生长的最适pH值;满足了该菌的生长需要。本发明的产孢方法为22~28℃,光照培养。本发明的胡桃球内生真菌木霉菌产孢培养基培养五天产孢量可达到7.4×107个孢子/毫升培养基。

    长春花毛状根再生植株的方法

    公开(公告)号:CN100340163C

    公开(公告)日:2007-10-03

    申请号:CN200510111221.7

    申请日:2005-12-08

    Abstract: 本发明是一种生物技术领域的长春花毛状根再生植株的方法。本发明将长春花毛状根外植体切段,置于愈伤组织诱导培养基上,经光照培养,形成愈伤组织,通过接种到不定芽诱导培养基上培养,形成芽点,挑选芽点的愈伤组织继续培养,经光照培养,形成不定芽,切取不定芽转移到生根培养基上,产生出不定根,将再生出的完整植株转移到快速繁殖培养基上继续培养,选取株系,移栽到盛有移栽基质的花盆中,通过驯化可获得生长正常的长春花植株。本发明筛选出适合长春花毛状根不定芽分化和生根的培养基,长春花毛状根的不定芽分化率达80%,不定芽生根率为100%,再生植株的移栽成活率为100%。

    转g10h基因提高长春花毛状根萜类吲哚生物碱含量的方法

    公开(公告)号:CN1807630A

    公开(公告)日:2006-07-26

    申请号:CN200610023233.9

    申请日:2006-01-12

    Abstract: 本发明是一种生物技术领域的转g10h基因提高长春花毛状根萜类吲哚生物碱含量的方法。本发明从长春花中克隆g10h基因,构建含g10h基因的植物表达载体,遗传转化长春花获得转基因长春花毛状根,高效液相色谱法测定长春花毛状根中生物碱含量,荧光定量PCR测定长春花毛状根生物碱生物合成相关基因的表达。本发明获得的转基因长春花毛状根中重要生物碱的含量显著提高,从而提供了一种提高长春花毛状根TIAs的方法,也为生产具重要临床需求的抗癌药物长春碱和长春新碱提供了一种新方法。

    红豆杉3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合成酶蛋白编码序列

    公开(公告)号:CN1252270C

    公开(公告)日:2006-04-19

    申请号:CN200410024891.0

    申请日:2004-06-03

    Abstract: 一种涉及生物基因工程领域的红豆杉3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合成酶蛋白编码序列。所分离出的DNA分子包括:编码具有红豆杉tm-Hmgs蛋白活性的多肽的核苷酸序列,所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.3中从核苷酸第98-1528位的核苷酸序列有至少70%的同源性;所述的核苷酸序列能在40-55℃条件下与SEQ ID NO.3中从核苷酸第98-1528位的核苷酸序列杂交。本发明是一种催化乙酰辅酶A和乙酰乙酰辅酶A缩合生成3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A的酶,有助于提高紫杉醇或其前体的含量,对于紫杉醇药源的严重匮乏问题的解决和保护人民的健康生长有所帮助。

    用萃取反萃分离纯化楸树内生真菌发酵液中楸灵素的方法

    公开(公告)号:CN104610383A

    公开(公告)日:2015-05-13

    申请号:CN201510031256.3

    申请日:2015-01-21

    Abstract: 本发明公开一种用萃取反萃分离纯化楸树内生真菌发酵液中楸灵素的方法:调整楸树内生真菌发酵液pH为4~6;用稀酸溶液预饱和处理乙酸乙酯,使得乙酸乙酯的pH和所述发酵液匹配;将调整好pH的楸树内生真菌发酵液与乙酸乙酯混匀,静置进行双液相萃取,收集乙酸乙酯相;将所述收集到的乙酸乙酯相和pH为7~11水相混匀,进行反萃取,回收水相即为纯化的楸灵素水溶液。与现有技术相比,本发明利用楸灵素的弱酸性,在保证80%以上的楸灵素收率的条件下,经过一次简单的萃取反萃过程,分离除去发酵液中的亲水杂质和疏水杂质,将楸灵素的纯度提高10倍以上,分离过程中乙酸乙酯可以悬蒸回收后重复利用,分离成本低,环境压力小。

    利用硅胶吸附醌类物质降低植物细胞褐化风险的方法

    公开(公告)号:CN103923873A

    公开(公告)日:2014-07-16

    申请号:CN201410100844.3

    申请日:2014-03-18

    Abstract: 本发明公开了一种利用硅胶吸附醌类物质降低植物细胞褐化风险的方法;包括如下步骤:制备特定形状的硅胶吸附材料,灭菌、备用;在细胞培养过程中使硅胶吸附材料和植物细胞培养物充分接触,硅胶吸附材料吸附醌类物质后转变为红褐色;当吸附达到饱和或者培养结束后,取出硅胶吸附材料。本发明选用硅胶作为细胞褐化相关醌类物质的吸附剂,既能避免吸附培养液中的细胞营养成分,又降低了细胞微环境中醌类物质的含量,避免植物(红豆杉)细胞褐化死亡,有利于提高植物(红豆杉)细胞培养的稳定性和细胞活性;由于褐化往往导致细胞代谢水平下降,因此采用硅胶吸附避免褐化可提高细胞中具有药物活性的次生代谢物,如红豆杉细胞中抗癌药物紫杉醇的产量。

    楸树内生真菌的原生质体的制备方法

    公开(公告)号:CN103756917A

    公开(公告)日:2014-04-30

    申请号:CN201410016834.1

    申请日:2014-01-14

    Abstract: 本发明提供了一种楸树内生真菌的原生质体的制备方法;所述方法包括以下步骤:步骤1,菌丝体的制备;步骤2,原生质体的制备;步骤3,原生质体纯化;步骤4,原生质体再生。本发明所述方法制备的原生质体数量较多,可达到6×107个/毫克菌丝,获得的原生质体的活力较高,再生率可达到1.2%。本发明选择培养12-24h的菌丝体,真菌处于快速生长期,生长快,细胞壁易于酶的裂解,释放出的原生质体的数量多,不易裂解,活力高。本发明选取5~30mg/ml?Glucanex复合酶作为细胞壁裂解酶液,裂解效率高,原生质体释放数量多。本发明选用KCl或NaCl作为渗透压稳定剂,保证了原生质体制备数量与原生质体的稳定。

    提高长春花毛状根萜类吲哚生物碱含量的方法

    公开(公告)号:CN100494387C

    公开(公告)日:2009-06-03

    申请号:CN200510112213.4

    申请日:2005-12-29

    Abstract: 本发明是一种生物技术领域的提高长春花毛状根TIAs含量的方法。本发明从长春花中克隆str和g10h基因,构建含str和g10h基因的植物表达载体,遗传转化长春花获得转基因长春花毛状根,高效液相色谱法测定长春花毛状根中TIAs含量,荧光定量PCR测定长春花毛状根TIAs生物合成相关基因的表达。本发明获得的转基因长春花毛状根中重要TIAs[抗癌药物长春碱(Vinblastine)、长春新碱(Vincristine)]的含量显著提高,其中长春碱含量比非转化对照根提高了234倍,从而提供了一种提高长春花毛状根TIAs的方法,也为生产具重要临床需求的抗癌药物长春碱和长春新碱提供了一种新方法。

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