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公开(公告)号：CN104630124B
公开(公告)日：2018-01-23
申请号：CN201310562366.3
申请日：2013-11-12
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 一株产纳豆激酶的地衣芽胞杆菌工程菌和用该菌生产纳豆激酶的方法，属于微生物基因工程和酶工程技术领域。本发明通过PCR技术扩增获得枯草芽胞杆菌MBS04‑6的纳豆激酶基因，利用地衣芽胞杆菌BL10作为表达宿主，以枯草芽胞杆菌168的启动子P43为启动子，以地衣芽胞杆菌WX‑02的胞外丝氨酸蛋白酶Vpr的信号肽为信号肽，以地衣芽胞杆菌WX‑02的α‑淀粉酶的终止子序列为终止子，将这些表达元件与穿梭载体pHY300PLK连接，构成表达载体，转化地衣芽胞杆菌BL10，即为产纳豆激酶的地衣芽胞杆菌工程菌BL10(pP43SNT)，该菌株于2013年9月10日保存于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M2013401。本发明还提供了该菌株生产纳豆激酶的方法，在液体发酵培养基中最大酶活力达到11.37FU/mL。
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公开(公告)号：CN104630123A
公开(公告)日：2015-05-20
申请号：CN201310562150.7
申请日：2013-11-12
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多基因缺失的地衣芽胞杆菌宿主菌BL10，保藏编号为CCTCCNO：M2013400。该宿主菌来源于地衣芽胞杆菌WX-02，部分或完全缺失了10个基因。这10个基因分别是8个蛋白酶基因(mpr，编码胞外金属蛋白酶；vpr，编码丝氨酸蛋白酶；aprX，胞内丝氨酸蛋白酶；epr，编码微小胞外蛋白酶；bpr，编码芽胞杆菌肽酶F；wprA，编码与细胞壁结合的蛋白酶；aprE，编码胞外碱性丝氨酸蛋白酶；bprA，编码芽胞杆菌肽酶F)和2个胞外分泌蛋白基因(hag，编码鞭毛蛋白；amyL，编码α-淀粉酶)。BL10完全无胞外蛋白酶活性，可降低蛋白酶对目标蛋白的降解作用。当利用该表达宿主表达目标蛋白时，表达量更高，该宿主菌有利于增强蛋白的表达。
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公开(公告)号：CN104630123B
公开(公告)日：2018-09-14
申请号：CN201310562150.7
申请日：2013-11-12
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多基因缺失的地衣芽胞杆菌宿主菌BL10，保藏编号为CCTCCNO：M2013400。该宿主菌来源于地衣芽胞杆菌WX‑02，部分或完全缺失了10个基因。这10个基因分别是8个蛋白酶基因(mpr，编码胞外金属蛋白酶；vpr，编码丝氨酸蛋白酶；aprX，胞内丝氨酸蛋白酶；epr，编码微小胞外蛋白酶；bpr，编码芽胞杆菌肽酶F；wprA，编码与细胞壁结合的蛋白酶；aprE，编码胞外碱性丝氨酸蛋白酶；bprA，编码芽胞杆菌肽酶F)和2个胞外分泌蛋白基因(hag，编码鞭毛蛋白；amyL，编码α‑淀粉酶)。BL10完全无胞外蛋白酶活性，可降低蛋白酶对目标蛋白的降解作用。当利用该表达宿主表达目标蛋白时，表达量更高，该宿主菌有利于增强蛋白的表达。
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公开(公告)号：CN104630124A
公开(公告)日：2015-05-20
申请号：CN201310562366.3
申请日：2013-11-12
Applicant: 华中农业大学
CPC classification number: C12N9/54 , C12Y304/21062
Abstract: 一株产纳豆激酶的地衣芽胞杆菌工程菌和用该菌生产纳豆激酶的方法，属于微生物基因工程和酶工程技术领域。本发明通过PCR技术扩增获得枯草芽胞杆菌MBS04-6的纳豆激酶基因，利用地衣芽胞杆菌BL10作为表达宿主，以枯草芽胞杆菌168的启动子P43为启动子，以地衣芽胞杆菌WX-02的胞外丝氨酸蛋白酶Vpr的信号肽为信号肽，以地衣芽胞杆菌WX-02的α-淀粉酶的终止子序列为终止子，将这些表达元件与穿梭载体pHY300PLK连接，构成表达载体，转化地衣芽胞杆菌BL10，即为产纳豆激酶的地衣芽胞杆菌工程菌BL10(pP43SNT)，该菌株于2013年9月10日保存于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M2013401。本发明还提供了该菌株生产纳豆激酶的方法，在液体发酵培养基中最大酶活力达到11.37FU/mL。
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