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发明公开
一种隐孢子虫蛋白激酶660 C端蛋白的制备及其应用无效

公开(公告)号：CN111154792A

公开(公告)日：2020-05-15

申请号：CN202010027841.7

申请日：2020-01-10

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 冯耀宇 , 张晨远 , 李娜 , 肖立华 , 郭亚琼

IPC: C12N15/70 , C12N15/54 , C12N9/12

Abstract: 本发明公开了一种隐孢子虫蛋白激酶660C端蛋白的制备及其应用，包括如下步骤：S1.以SEQ ID NO：1～2所示扩增引物PCR扩增反应得到Cp660C基因片段；S2.将Cp660C基因片段与原核表达质粒双酶切，连接，得到Cp660C重组质粒；S3.将Cp660C重组质粒转入表达宿主菌，挑取阳性克隆菌；S4.将阳性克隆菌扩大培养至生长对数期，诱导表达；S5.诱导表达后的菌液，冷冻离心收集菌体，弃上清，清洗菌体后重悬，添加蛋白酶抑制剂，冰浴超声裂解菌体，得裂解液，再低温离心取上清，滤膜过滤；S6.取步骤过滤后上清液经Ni柱纯化，洗脱，收集目的蛋白。本发明方法能够得到高纯度、高抗原特异性的重组蛋白，所纯化得到的蛋白能够进一步用于隐孢子虫蛋白功能性分析研究。

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