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公开(公告)号：CN107699536A
公开(公告)日：2018-02-16
申请号：CN201711203686.4
申请日：2017-11-27
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种基因工程菌及其在生产D-1,2,4-丁三醇中的应用。该基因工程菌为构建克隆表达2-酮酸脱羧酶基因MdlC和木糖脱氢酶基因XylB,木糖酸脱水酶基因YjhG和醇脱氢酶基因YqhD,并将构建好的基因转入宿主菌BL21(DE3)的细胞内得基因工程菌BL21-02,在此基因工程菌的基础上筛选新的木糖酸脱水酶，得到新的基因工程菌，经发酵培养生产D-1,2,4-丁三醇。本发明通过筛选所提供的木糖酸脱水酶基因CcXylD,能够提高D-木糖合成D-1,2,4-丁三醇的能力。再将本发明中最适的木糖酸脱水酶基因CcXylD与来源于乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）的α-酮酸脱羧酶KdcA共同应用到D-1,2,4-丁三醇生产过程中，得到最优菌株BL21-15,最终BT产量可达10.66g/L。
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公开(公告)号：CN107674889A
公开(公告)日：2018-02-09
申请号：CN201711190972.1
申请日：2017-11-24
Applicant: 南京工业大学
IPC: C12P7/18
Abstract: 本发明公开了一种酶反应合成1,2,4-丁三醇的方法，其特征在于，以D-木糖脱氢酶、D-木糖酸脱水酶、苯甲酰甲酸脱羧酶、醇脱氢酶为催化剂，在反应体系中催化D-木糖转化为D-1,2,4-丁三醇；所述反应体系包括如下组分：50mM PBS(NaHPO4、NaH2PO4)、MgCl2 6mM、NAD+0.5mM、NADH 0.5mM、TPP 0.4mM。本发明通过控制各个酶的酶量，提高了体外合成丁三醇的能力，解决了微生物法合成法带来的副产物多，后续分离工艺复杂等不利影响。
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公开(公告)号：CN107674889B
公开(公告)日：2020-11-03
申请号：CN201711190972.1
申请日：2017-11-24
Applicant: 南京工业大学
IPC: C12P7/18
Abstract: 本发明公开了一种酶反应合成1,2,4‑丁三醇的方法，其特征在于，以D‑木糖脱氢酶、D‑木糖酸脱水酶、苯甲酰甲酸脱羧酶、醇脱氢酶为催化剂，在反应体系中催化D‑木糖转化为D‑1,2,4‑丁三醇；所述反应体系包括如下组分：50mM PBS(NaHPO4、NaH2PO4)、MgCl26mM、NAD+0.5mM、NADH 0.5mM、TPP 0.4mM。本发明通过控制各个酶的酶量，提高了体外合成丁三醇的能力，解决了微生物法合成法带来的副产物多，后续分离工艺复杂等不利影响。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107988128B
公开(公告)日：2021-02-05
申请号：CN201711203284.4
申请日：2017-11-27
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种产D‑1,2,4‑丁三醇的基因工程菌及其应用,将2‑酮酸脱羧酶基因、木糖脱氢酶基因XylB、木糖酸脱水酶YjhG和醇脱氢酶基因YqhD转入宿主菌BL21（DE3）得到基因工程菌，所述2‑酮酸脱羧酶基因为来源于乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）的α‑酮酸脱羧酶基因KdcA。经发酵培养生产D‑1,2,4‑丁三醇。本发明通过筛选所提供的α‑酮酸脱羧酶基因KdcA,能够有效提高D‑木糖合成D‑1,2,4‑丁三醇的能力，最终可达6.82g/L。
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公开(公告)号：CN107699536B
公开(公告)日：2021-02-05
申请号：CN201711203686.4
申请日：2017-11-27
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种基因工程菌及其在生产D‑1,2,4‑丁三醇中的应用。该基因工程菌为构建克隆表达2‑酮酸脱羧酶基因MdlC和木糖脱氢酶基因XylB,木糖酸脱水酶基因YjhG和醇脱氢酶基因YqhD,并将构建好的基因转入宿主菌BL21(DE3)的细胞内得基因工程菌BL21‑02,在此基因工程菌的基础上筛选新的木糖酸脱水酶，得到新的基因工程菌，经发酵培养生产D‑1,2,4‑丁三醇。本发明通过筛选所提供的木糖酸脱水酶基因CcXylD,能够提高D‑木糖合成D‑1,2,4‑丁三醇的能力。再将本发明中最适的木糖酸脱水酶基因CcXylD与来源于乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）的α‑酮酸脱羧酶KdcA共同应用到D‑1,2,4‑丁三醇生产过程中，得到最优菌株BL21‑15,最终BT产量可达10.66g/L。
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公开(公告)号：CN107699534A
公开(公告)日：2018-02-16
申请号：CN201710977497.6
申请日：2017-10-17
Applicant: 南京工业大学
CPC classification number: C12N9/88 , C12N9/0006 , C12N15/70 , C12P7/18 , C12Y101/01 , C12Y401/01001 , C12Y402/01005
Abstract: 本发明公开了一种利用D-阿拉伯糖生产D-1,2,4-丁三醇的基因工程菌，在宿主菌中表达D-阿拉伯糖脱氢酶、D-阿拉伯糖酸脱水酶、2-酮酸脱羧酶和醇脱氢酶。本发明先将来源于硫磺矿硫化叶菌基因片段AraDH和AraD和来源于恶臭假单胞杆菌mdlc、大肠杆菌的adhp构建到质粒PRSF和质粒PETduet上两种质粒PRSF-T7-AraDH-T7-AraD和PETduet-T7-mdlc-T7-adhp，再将已构建好的双质粒导入到大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中构建好重组菌株E.coliBL21-PAD-PMP，利用D-阿拉伯糖生产D-1,2,4丁三醇。
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公开(公告)号：CN107988128A
公开(公告)日：2018-05-04
申请号：CN201711203284.4
申请日：2017-11-27
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种产D-1,2,4-丁三醇的基因工程菌及其应用,将2-酮酸脱羧酶基因、木糖脱氢酶基因XylB、木糖酸脱水酶YjhG和醇脱氢酶基因YqhD转入宿主菌BL21（DE3）得到基因工程菌，所述2-酮酸脱羧酶基因为来源于乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）的α-酮酸脱羧酶基因KdcA。经发酵培养生产D-1,2,4-丁三醇。本发明通过筛选所提供的α-酮酸脱羧酶基因KdcA,能够有效提高D-木糖合成D-1,2,4-丁三醇的能力，最终可达6.82g/L。
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公开(公告)号：CN107815436A
公开(公告)日：2018-03-20
申请号：CN201710963451.9
申请日：2017-10-17
Applicant: 南京工业大学
CPC classification number: C12N9/88 , C12N9/0006 , C12N15/70 , C12P7/18 , C12Y101/01002 , C12Y401/01072 , C12Y402/01082
Abstract: 本发明公开了一株利用D-木糖生产D-1,2,4-丁三醇的基因工程菌，先构建两种质粒PMB和PGP，再将已构建好的双质粒导入到大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中构建好重组菌株E.coliBL21-PMB-PGP，全细胞催化生产D-1,2,4丁三醇。本发明方法解决了发酵法生产周期长，代谢产物复杂，底物转化率低，产物分离提取困难，及能耗高的问题，也解决了酶法催中催化过程不易实现的不足，提高催化效率，同时省了酶纯化过程。
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