公开(公告)号：CN105548404B

公开(公告)日：2017-09-26

申请号：CN201610029560.9

申请日：2016-01-15

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 金青 ,  焦春燕 ,  孙时伟 ,  蔡永萍 ,  林毅 ,  宋程 ,  李姝妹 ,  王燕

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/06

Abstract: 本发明公开了一种基于代谢组学鉴别霍山米斛与霍山铁皮石斛品种的方法，具体步骤包括：(1)石斛样品的采集；(2)石斛代谢组学样品的制备；(3)石斛样品代谢产物的检测；(4)代谢组学数据的处理与分析。本发明的优点在于：采用代谢组学方法获得石斛大量的内源性代谢物信息，并从中筛选出鉴别霍山米斛与霍山铁皮石斛的特征性代谢产物，进而从整体上区别这两种石斛品种，技术方法先进、实验结果可靠，为石斛的品种鉴定和质量评价提供了一种优良方法。

公开(公告)号：CN103076294B

公开(公告)日：2016-06-01

申请号：CN201210591479.1

申请日：2012-12-29

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 金青 ,  林毅 ,  蔡永萍 ,  宋程 ,  孙旭

IPC: G01N21/31

Abstract: 本发明公开了一种测定石斛生物碱含量的方法，石斛干品粉碎后，用碱性氯仿水浴回流提取生物碱，测定液中添加非离子表面活性剂吐温-80，溴甲酚绿酸性染料比色法测定石斛生物碱含量。本发明在石斛生物碱测定体系中，添加适量的吐温-80，使溴甲酚绿-氯仿萃取效率提高，提高了石斛生物碱测定的灵敏度，并能快速分层，操作简便，重现性好，测定结果稳定。

公开(公告)号：CN103604877B

公开(公告)日：2015-09-30

申请号：CN201310526400.1

申请日：2013-10-29

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 林毅 ,  宋程 ,  金青 ,  蔡永萍 ,  钟伦锁 ,  孙时伟 ,  张玲

IPC: G01N30/02

Abstract: 本发明公开了一种石斛生物碱类成分指纹图谱测定方法，是通过恒温水浴回流萃取技术，利用氨水浸渍石斛粉末，再经氯仿萃取，过滤浓缩干燥得石斛总生物碱粗品，粗品用甲醇溶解得储备液用于高效液相色谱分析，得到石斛生物碱类指纹图谱。本发明优点：所得色谱指纹图谱能较全面反映石斛所含生物碱类成分，体现石斛生物碱类的复杂性，能为不同品种石斛鉴别提供科学依据；所建立的HPLC指纹图谱具有较大的稳定性和重现性，该研究为石斛品种质量控制提供科学参考。

公开(公告)号：CN105548404A

公开(公告)日：2016-05-04

申请号：CN201610029560.9

申请日：2016-01-15

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 金青 ,  焦春燕 ,  孙时伟 ,  蔡永萍 ,  林毅 ,  宋程 ,  李姝妹 ,  王燕

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/06

CPC classification number: G01N30/02 ,  G01N30/06 ,  G01N2030/067

Abstract: 本发明公开了一种基于代谢组学鉴别霍山米斛与霍山铁皮石斛品种的方法，具体步骤包括：(1)石斛样品的采集；(2)石斛代谢组学样品的制备；(3)石斛样品代谢产物的检测；(4)代谢组学数据的处理与分析。本发明的优点在于：采用代谢组学方法获得石斛大量的内源性代谢物信息，并从中筛选出鉴别霍山米斛与霍山铁皮石斛的特征性代谢产物，进而从整体上区别这两种石斛品种，技术方法先进、实验结果可靠，为石斛的品种鉴定和质量评价提供了一种优良方法。

公开(公告)号：CN103604877A

公开(公告)日：2014-02-26

申请号：CN201310526400.1

申请日：2013-10-29

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 林毅 ,  宋程 ,  金青 ,  蔡永萍 ,  钟伦锁 ,  孙时伟 ,  张玲

IPC: G01N30/02

Abstract: 本发明公开了一种石斛生物碱类成分指纹图谱测定方法，是通过恒温水浴回流萃取技术，利用氨水浸渍石斛粉末，再经氯仿萃取，过滤浓缩干燥得石斛总生物碱粗品，粗品用甲醇溶解得储备液用于高效液相色谱分析，得到石斛生物碱类指纹图谱。本发明优点：所得色谱指纹图谱能较全面反映石斛所含生物碱类成分，体现石斛生物碱类的复杂性，能为不同品种石斛鉴别提供科学依据；所建立的HPLC指纹图谱具有较大的稳定性和重现性，该研究为石斛品种质量控制提供科学参考。

公开(公告)号：CN103076294A

公开(公告)日：2013-05-01

申请号：CN201210591479.1

申请日：2012-12-29

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 金青 ,  林毅 ,  蔡永萍 ,  宋程 ,  孙旭

IPC: G01N21/31

Abstract: 本发明公开了一种测定石斛生物碱含量的方法，石斛干品粉碎后，用碱性氯仿水浴回流提取生物碱，测定液中添加非离子表面活性剂吐温-80，溴甲酚绿酸性染料比色法测定石斛生物碱含量。本发明在石斛生物碱测定体系中，添加适量的吐温-80，使溴甲酚绿-氯仿萃取效率提高，提高了石斛生物碱测定的灵敏度，并能快速分层，操作简便，重现性好，测定结果稳定。

公开(公告)号：CN106501437B

公开(公告)日：2017-11-24

申请号：CN201611221950.2

申请日：2016-12-27

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 金青 ,  焦春燕 ,  蔡永萍 ,  林毅 ,  郑思炎 ,  宋程

IPC: G01N30/88 ,  G01N30/06

Abstract: 本发明提供了基于UPLC/LTQ‑Orbitrap Velos MS检测石斛生物碱成分的方法，通过超声处理，并用纯甲醇溶液进行提取，针对生物碱成分的化学性质，采用酸水溶解甲醇提取物，并进一步碱化，使生物碱盐转变为游离的生物碱，利用二氯甲烷溶液进行萃取，用超高效液相色谱分离所述游离生物碱待测样品，将分离后的生物碱成分用质谱检测；采用OSI/SMMS软件完成未知代谢物定性。本发明首次采用UPLC/LTQ‑Orbitrap Velos MS技术对石斛中生物碱成分进行定性检测，共鉴定出22种生物碱成分，且均首次在石斛中被分离检测出，明确了石斛生物碱成分的类型，为研究其药理作用奠定了理论基础。

公开(公告)号：CN106680403A

公开(公告)日：2017-05-17

申请号：CN201611261842.8

申请日：2016-12-30

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 金青 ,  郑思炎 ,  宋程 ,  焦春燕 ,  朱英鹏 ,  蔡永萍 ,  林毅 ,  张光鑫

IPC: G01N30/06

CPC classification number: G01N30/06

Abstract: 本发明公开了一种检测铁皮石斛中石斛酚的方法，包括以下步骤：(1)标准品溶液的配制；(2)供试品溶液的配制：称取铁皮石斛样品，然后用甲醇水溶液作为提取溶剂对铁皮石斛样品进行提取，得到铁皮石斛提取液，之后将铁皮石斛提取液中的溶剂除干，再复溶于色谱级甲醇中，然后放置12～24小时，最后进行过滤处理，所得的滤液即为供试品溶液；(3)供试品溶液的测定：采用HPLC‑DAD检测方法对标准品溶液和供试品溶液进行检测。本发明工艺简单，操作方便、高效，应用成本低，而且检测灵敏度和准确度高。本发明采用甲醇水溶液作为提取剂，既能高效提取石斛酚，又能避免过多大极性杂质的干扰。本发明确定了石斛酚24.107min～24.352min，230nm～300nm处有最大吸收峰。

公开(公告)号：CN106501437A

公开(公告)日：2017-03-15

申请号：CN201611221950.2

申请日：2016-12-27

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 金青 ,  焦春燕 ,  蔡永萍 ,  林毅 ,  郑思炎 ,  宋程

IPC: G01N30/88 ,  G01N30/06

CPC classification number: G01N30/88 ,  G01N30/06

Abstract: 本发明提供了基于UPLC/LTQ-Orbitrap Velos MS检测石斛生物碱成分的方法，通过超声处理，并用纯甲醇溶液进行提取，针对生物碱成分的化学性质，采用酸水溶解甲醇提取物，并进一步碱化，使生物碱盐转变为游离的生物碱，利用二氯甲烷溶液进行萃取，用超高效液相色谱分离所述游离生物碱待测样品，将分离后的生物碱成分用质谱检测；采用OSI/SMMS软件完成未知代谢物定性。本发明首次采用UPLC/LTQ-Orbitrap Velos MS技术对石斛中生物碱成分进行定性检测，共鉴定出22种生物碱成分，且均首次在石斛中被分离检测出，明确了石斛生物碱成分的类型，为研究其药理作用奠定了理论基础。