公开(公告)号：CN101531708B

公开(公告)日：2011-12-21

申请号：CN200910111462.X

申请日：2009-04-14

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 林文雄 ,  熊君 ,  林辉锋

IPC: C07K14/00 ,  C07K1/14 ,  C12N1/00

Abstract: 一种高效的土壤蛋白质提取方法是把土壤加入预冷的土壤蛋白质提取缓冲液混匀后置4℃，摇床振荡过夜。振荡液用粗滤纸于布氏漏斗真空抽滤，取抽滤液过大孔树脂(D101)，取过柱液过0.22μm微孔滤膜，滤液为胞外蛋白质母液；滤膜上细胞经洗涤、破碎、离心分离和真空干燥获得干粉，干粉即为胞内土壤蛋白质沉淀物。胞外蛋白质母液经离心、分离和真空干燥获胞外土壤蛋白质干粉；胞内蛋白质干粉经裂解在10％聚丙烯酰胺凝胶SDS-PAGE电泳即可清楚分离，该方法具有高分离效率，所提微生物的得率为37.5％，高于传统方法0.1-1％的得率，建立了一种简易的操作流程，提高了得率，SDS-PAGE分辨率和质谱鉴定效果好。

公开(公告)号：CN101531708A

公开(公告)日：2009-09-16

申请号：CN200910111462.X

申请日：2009-04-14

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 林文雄 ,  熊君 ,  林辉锋

IPC: C07K14/00 ,  C07K1/14 ,  C12N1/00

Abstract: 一种高效的土壤蛋白质提取方法是把土壤加入预冷的土壤蛋白质提取缓冲液混匀后置4℃，摇床振荡过夜。振荡液用粗滤纸于布氏漏斗真空抽滤，取抽滤液过大孔树脂(D101)，取过柱液过0.22μm微孔滤膜，滤液为胞外蛋白质母液；滤膜上细胞经洗涤、破碎、离心分离和真空干燥获得干粉，干粉即为胞内土壤蛋白质沉淀物。胞外蛋白质母液经离心、分离和真空干燥获胞外土壤蛋白质干粉；胞内蛋白质干粉经裂解在10％聚丙烯酰胺凝胶SDS－PAGE电泳即可清楚分离，该方法具有高分离效率，所提微生物的得率为37.5％，高于传统方法0.1－1％的得率，建立了一种简易的操作流程，提高了得率，SDS－PAGE分辨率和质谱鉴定效果好。