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公开(公告)号：CN118185895B
公开(公告)日：2024-10-01
申请号：CN202311766841.9
申请日：2023-12-21
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种细菌来源的蔗糖合酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明的野生型纯酶的比酶活为7.61±0.84U/mg，突变体G632D/K633R的比酶活达55.41±0.75U/mg，相对野生型比酶活提高7.28倍。突变体G632D/K633R在55℃处理30分钟后仍有42％以上的残留酶活性，相同处理条件下野生型只剩余12％。相比野生型酶，该突变体酶G632D/K633R的比酶活和热稳定性都有很明显的提高，有利于实现UDPG的低成本生成，进而为活性糖类物质，如莱鲍迪苷D等的生物合成提供廉价易得的底物原料。
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公开(公告)号：CN118185895A
公开(公告)日：2024-06-14
申请号：CN202311766841.9
申请日：2023-12-21
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种细菌来源的蔗糖合酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明的野生型纯酶的比酶活为7.61±0.84U/mg，突变体G632D/K633R的比酶活达55.41±0.75U/mg，相对野生型比酶活提高7.28倍。突变体G632D/K633R在55℃处理30分钟后仍有42％以上的残留酶活性，相同处理条件下野生型只剩余12％。相比野生型酶，该突变体酶G632D/K633R的比酶活和热稳定性都有很明显的提高，有利于实现UDPG的低成本生成，进而为活性糖类物质，如莱鲍迪苷D等的生物合成提供廉价易得的底物原料。
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公开(公告)号：CN114790452B
公开(公告)日：2024-03-26
申请号：CN202210399511.X
申请日：2020-11-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种对腈类化合物具有高稳定性的腈水合酶突变体，属于基因工程和酶工程领域。本发明提供的腈水合酶突变体Str.t NHase‑βL48D在65℃的半衰期大约是43分钟，相比其他NHase酶热稳定性有显著提高。采用本发明的技术方案，对于以烟腈、丙烯腈、苯甲腈、2‑氰基吡嗪腈、异丁腈、正戊腈、肉桂腈等腈类化合物为底物的反应，其底物耐受性得到了明显的提高。
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公开(公告)号：CN117487778A
公开(公告)日：2024-02-02
申请号：CN202311435035.3
申请日：2023-10-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种全新的基于CRISPR‑Cas12b的碱基编辑器的构建及其应用，属于基因工程技术领域。本发明通过对BhCas12b进行失活突变，获得了失活版本的dBhCas12b。本发明基于dBhCas12b，在微生物中构建了具有拓展编辑窗口的碱基编辑器，编辑窗口在大肠杆菌中最高可达63nt，是目前微生物细胞中编辑窗口最宽的CBE系统。最终，本发明将该系统用于基因表达的多样化以及蛋白质的原位进化中，并且获得了一系列梯度表达的构建体以及高版本底盘细胞。本发明提供了一种超宽编辑窗口的新型BE系统，该系统能够在代谢工程、蛋白质工程以及基因工程的各个方面体现出巨大的应用价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116622702A
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN202211197736.3
申请日：2020-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种人工设计的新型枯草芽孢杆菌终止子及其应用，属于基因工程技术领域。本发明首先对不同的终止子的活性进行表征，接下来使用不同终止子测定平台对终止子的终止次效率进行测定，得到了一系列可提高目的蛋白产量的新型终止子，以绿色荧光蛋白基因作为终止子上游基因，以红色荧光蛋白基因作为终止子下游基因，表征终止子对上下游基因的调控水平。结果表明，这些新型终止子对于提高上游基因表达量和抑制下游基因表达量都有良好的效果。将一系列不同终止子应用于纳豆激酶和普鲁兰酶重组蛋白表达中，结果表明，这些终止子有助于提高蛋白的酶活和蛋白表达量的提升，这对在枯草芽孢杆菌中生产目的蛋白具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN114107309B
公开(公告)日：2023-07-25
申请号：CN202111391569.1
申请日：2021-11-19
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/115 , C12N15/75 , C12N15/67 , C12N1/21 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种非天然茶碱RNA分子开关，属于基因工程技术领域。本发明通过设计随机序列获得一系列非天然茶碱核糖开关，以绿色荧光蛋白基因为目的基因，通过对本底荧光强度/OD600、诱导后荧光强度/OD600和诱导率三个指标综合评价筛选，得到了一种可调控外源蛋白表达的茶碱核糖开关2nt。当茶碱核糖开关2nt与启动子P43组合时，诱导水平高与不含有茶碱核糖开关的表达水平相近，诱导率达到6.5倍。当以天冬氨酶和β‑葡糖醛酸苷酶基因为目的基因时，加入4mM茶碱溶液，可以使两种酶均成功受诱导而表达。该过程中不需要其他蛋白因子的参与，并且能够有效快速地实现基因调控。
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公开(公告)号：CN113817659B
公开(公告)日：2023-07-25
申请号：CN202111076165.3
申请日：2021-09-14
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/64 , C12N15/60 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N15/31 , C12P13/06 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种代谢工程改造大肠杆菌发酵制备β‑丙氨酸的方法，属于生物工程领域。本发明构建了一种工程菌株，通过游离型表达质粒分别过表达panD基因、aspA基因、大肠杆菌来源的ppc基因、gldA基因和dhaKLM基因，敲除了染色体上的lacI基因、乙醛羧酸循环抑制子iclR和富马酸消耗途径的fumA和fumC基因获得高效生产β‑丙氨酸的重组菌。该重组菌株能够以廉价的甘油为底物，发酵生成附加值更高的β‑丙氨酸，发酵50h，β‑丙氨酸产量可达37.9g/L，为工业绿色、高效生产β‑丙氨酸提供了技术支持。
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公开(公告)号：CN116286814A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202211197866.7
申请日：2020-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌高效人工终止子及其应用，属于基因工程技术领域。本发明首先对不同的终止子的活性进行表征，接下来使用不同终止子测定平台对终止子的终止次效率进行测定，得到了一系列可提高目的蛋白产量的新型终止子，以绿色荧光蛋白基因作为终止子上游基因，以红色荧光蛋白基因作为终止子下游基因，表征终止子对上下游基因的调控水平。结果表明，这些新型终止子对于提高上游基因表达量和抑制下游基因表达量都有良好的效果。将一系列不同终止子应用于纳豆激酶和普鲁兰酶重组蛋白表达中，结果表明，这些终止子有助于提高蛋白的酶活和蛋白表达量的提升，这对在枯草芽孢杆菌中生产目的蛋白具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN112481278B
公开(公告)日：2023-02-21
申请号：CN202011449689.8
申请日：2020-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于AIP诱导的生物传感器及其应用，属于基因工程技术领域。本发明将agr群体感应系统感受AIP的关键组分异源构建至枯草芽孢杆菌168中，使其能够在AIP的诱导下表达绿色荧光蛋白sfGFP。利用该系统，可以通过sfGFP的表达荧光反应AIP的浓度。同时将AIP合成相关基因异源构建至大肠杆菌中，使得大肠杆菌能够合成分泌AIP，获得AIP产生菌。在AIP产生菌中建立AIP的突变体库，在AIP感应菌种筛选突变的AIP，实现AIP高通量突变和筛选。该系统能够方便地研究AIP不同位点突变对其功能的影响，并且获得具有不同特性的突变体AIP。
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