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公开(公告)号：CN114685678A
公开(公告)日：2022-07-01
申请号：CN202011618569.6
申请日：2020-12-30
Applicant: 江苏贝奥泰克生物科技有限公司 , 北京大学
Abstract: 一种分离型内含肽作为连接手段进行胞内合成BLA无痕索烃及其制备方法，属于蛋白质偶联技术领域。本发明的制备方法为：(1)基因质粒构建：将目标蛋白的N端和C端分别融合分离型内含肽的两部分IC与IN；经过反式剪切，IC与IN脱除实现目标蛋白质的首尾相连，唯一保留部分为实现反式剪切必需的氨基酸残基，得到内含肽基因卡带；(2)将步骤(1)中构建得叨叨额内含肽基因卡带引入载体质粒中；(3)在细胞中表达上述所述载体质粒；(4)对上述载体质粒进行蛋白表达与纯化，最终得到BLA无痕索烃。本发明无痕BLA索烃intX‑FL的催化速率以及催化能力都较好，最大程度减少融合成分、实现严格意义的主链环化提供极好的平台。
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公开(公告)号：CN113045633B
公开(公告)日：2022-04-26
申请号：CN201911373603.5
申请日：2019-12-27
Applicant: 北京大学
Abstract: 本发明公布了一种蛋白质异质缠结基元的设计与复杂索烃结构的制备方法。本发明对肿瘤抑制因子p53二聚缠结基元(X)进行定点突变，得到异质缠结基元X+/X‑，结合蛋白质偶联反应对，通过组装偶联协同的策略实现了蛋白质异质索烃和高阶索烃([3]索烃/[4]索烃)的细胞内原位合成。该方法具有模块化、可基因编码的特点，能够高效精准合成蛋白质拓扑结构。通过引入目标蛋白质，实现目标蛋白的索烃化构建，且索烃化不会明显影响蛋白质的结构和活性。在高阶索烃骨架中引入抗体或抗体类似物还可以构建“人工抗体”，骨架的多价性显著提高了其对受体蛋白的亲和力，对于蛋白抗体药物的研发具有重要意义。
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公开(公告)号：CN110272913B
公开(公告)日：2020-11-03
申请号：CN201910504698.3
申请日：2019-06-12
Applicant: 北京大学
Abstract: 本发明公布了一种基于索烃化的蛋白质偶联方法。本发明将SpyTag‑SpyCatcher复合物中各二级组分(SpyTag,BDTag和SpyStapler)进行重新连线，引入人工设计的链缠结结构，发展了结合缠绕和催化的蛋白质活性模板方法，可实现不同目标蛋白质以索烃形式连接的机械键偶联。利用该方法对无序蛋白质或折叠蛋白质进行异质索烃化，均不会明显影响蛋白质的结构和性能。该索烃化过程还可通过共表达体系实现细胞内直接表达制备。由于索烃结构对目标蛋白质具有构象限制作用和空间控制，它可提升目标蛋白质的稳定性。本发明实现了蛋白质异质索烃的简洁合成，是一种非常有价值的新型蛋白质偶联策略。
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公开(公告)号：CN111560391A
公开(公告)日：2020-08-21
申请号：CN202010436910.X
申请日：2020-05-21
Applicant: 北京大学
Abstract: 本发明公布了一种蛋白质异质索烃的生物合成方法。通过模拟天然拓扑蛋白质合成中的多步翻译后修饰过程，基于合理的基因序列设计，结合原位组装、链断裂和定点环化，发展了基于两种正交偶联方式的生物合成体系，可以实现蛋白质异质索烃的模块化合成。该方法利用p53dim结构域等缠结基元的分子内二聚来提高蛋白质异质索烃的产量，同时不需要额外的胞外反应。当多肽-蛋白质反应对与断裂内含肽联用时，可以实现支化蛋白质异质索烃的生物合成；当两种正交断裂内含肽联用时，可以获得完全主链环化的蛋白质异质索烃。本发明拓展了拓扑蛋白质的合成方法，可以简洁地实现蛋白质异质索烃的生物合成。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116003626A
公开(公告)日：2023-04-25
申请号：CN202211121806.7
申请日：2022-09-15
Applicant: 北京大学
IPC: C07K19/00 , C12N15/62 , C07K14/47 , C07K1/22 , C12N15/70 , A61K38/20 , A61K38/21 , A61K47/64 , A61P31/04 , A61P31/12 , A61P35/00 , A61P37/02 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供了一种基于机械偶联的蛋白质异质索烃的生物合成方法及其应用。本发明基于二聚结构基元介导的分子内缠结和正交分离型内含肽介导的定点环化，能够实现含有目标蛋白质与功能蛋白质基元的蛋白质异质索烃的模块化制备。本发明提供的方法基于合理的基因序列设计，不需要额外的胞外反应，通过表达纯化即可获得相应的蛋白质异质索烃。所制备的蛋白质异质索烃可以保留各组成功能基元对相应受体的亲和能力，同时由于索烃结构对蛋白质的构象具有限制作用，可以有效提升蛋白质的整体稳定性。利用本发明所述方法可将蛋白质药物的线型主链拓展为链环拓扑结构，制备得到的基于机械偶联的蛋白质异质索烃能够有效延长蛋白质药物的体内半衰期。
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公开(公告)号：CN111560391B
公开(公告)日：2022-02-11
申请号：CN202010436910.X
申请日：2020-05-21
Applicant: 北京大学
Abstract: 本发明公布了一种蛋白质异质索烃的生物合成方法。通过模拟天然拓扑蛋白质合成中的多步翻译后修饰过程，基于合理的基因序列设计，结合原位组装、链断裂和定点环化，发展了基于两种正交偶联方式的生物合成体系，可以实现蛋白质异质索烃的模块化合成。该方法利用p53dim结构域等缠结基元的分子内二聚来提高蛋白质异质索烃的产量，同时不需要额外的胞外反应。当多肽‑蛋白质反应对与断裂内含肽联用时，可以实现支化蛋白质异质索烃的生物合成；当两种正交断裂内含肽联用时，可以获得完全主链环化的蛋白质异质索烃。本发明拓展了拓扑蛋白质的合成方法，可以简洁地实现蛋白质异质索烃的生物合成。
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公开(公告)号：CN110272913A
公开(公告)日：2019-09-24
申请号：CN201910504698.3
申请日：2019-06-12
Applicant: 北京大学
Abstract: 本发明公布了一种基于索烃化的蛋白质偶联方法。本发明将SpyTag-SpyCatcher复合物中各二级组分(SpyTag,BDTag和SpyStapler)进行重新连线，引入人工设计的链缠结结构，发展了结合缠绕和催化的蛋白质活性模板方法，可实现不同目标蛋白质以索烃形式连接的机械键偶联。利用该方法对无序蛋白质或折叠蛋白质进行异质索烃化，均不会明显影响蛋白质的结构和性能。该索烃化过程还可通过共表达体系实现细胞内直接表达制备。由于索烃结构对目标蛋白质具有构象限制作用和空间控制，它可提升目标蛋白质的稳定性。本发明实现了蛋白质异质索烃的简洁合成，是一种非常有价值的新型蛋白质偶联策略。
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公开(公告)号：CN105061581B
公开(公告)日：2018-10-16
申请号：CN201510593863.9
申请日：2015-09-17
Applicant: 北京大学
Abstract: 本发明公开了一种可基因编码的全蛋白质索烃的制备方法，利用蛋白互锁结构单元使蛋白质单体分子之间发生相互缠绕，并利用类似于谍标签‑谍捕手偶联反应对的蛋白质反应对使蛋白质单体分子发生环化形成索烃，首先构建包含所述蛋白质反应对和蛋白互锁结构单元的重组蛋白对应的编码基因并引入载体质粒中，然后在细胞中进行表达，纯化表达蛋白，得到蛋白质索烃。本发明利用基因编码的形式，在细胞体内较为高效地获得具有索烃结构的蛋白质，能够最大程度地降低蛋白质索烃制备的难度，获得功能稳定的活性蛋白质。
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公开(公告)号：CN105061581A
公开(公告)日：2015-11-18
申请号：CN201510593863.9
申请日：2015-09-17
Applicant: 北京大学
CPC classification number: C07K14/4746
Abstract: 本发明公开了一种可基因编码的全蛋白质索烃的制备方法，利用蛋白互锁结构单元使蛋白质单体分子之间发生相互缠绕，并利用类似于谍标签-谍捕手偶联反应对的蛋白质反应对使蛋白质单体分子发生环化形成索烃，首先构建包含所述蛋白质反应对和蛋白互锁结构单元的重组蛋白对应的编码基因并引入载体质粒中，然后在细胞中进行表达，纯化表达蛋白，得到蛋白质索烃。本发明利用基因编码的形式，在细胞体内较为高效地获得具有索烃结构的蛋白质，能够最大程度地降低蛋白质索烃制备的难度，获得功能稳定的活性蛋白质。
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