一种高热稳定性高葡萄糖耐受性的β-葡萄糖苷酶突变体及其应用

    公开(公告)号:CN118703477A

    公开(公告)日:2024-09-27

    申请号:CN202411038826.7

    申请日:2024-07-31

    Abstract: 本发明属于酶工程技术领域,具体涉及一种高热稳定性高葡萄糖耐受性的β‑葡萄糖苷酶突变体及其应用。本发明采用计算机模拟联合回复突变的方法,通过利用一次突变、二次突变、表达、纯化等技术手段,以近暗散白蚁的肠道中的β‑葡萄糖苷酶Bgl8为基础,获得高热稳定性、高葡萄糖耐受性β‑葡萄糖苷酶突变体,该突变体包括476个氨基酸,具有优异的热稳定性以及葡萄糖耐受性,半衰期从49 h增加到了110 h,提升了2.24倍,催化活性从1.001(kcat/Km)增加到了2.914(kcat/Km),提高了2.91倍;本发明最终得到的二次突变体葡萄糖耐受性稍有下降,其IC50为1.35 mol/L,但仍满足在实际生产条件下的标准。证明了本发明采用的计算机辅助协同定点突变的方法具有良好的实验可行性和应用前景。

    昆布寡糖磷酸化酶在合成昆布寡糖中的应用及多酶催化体系

    公开(公告)号:CN118165950A

    公开(公告)日:2024-06-11

    申请号:CN202410304852.3

    申请日:2024-03-18

    Abstract: 本发明属于酶工程技术领域,具体涉及昆布寡糖磷酸化酶在合成昆布寡糖中的应用及多酶催化体系。本发明通过对昆布寡糖磷酸化酶THA_1941催化葡萄糖和葡萄糖‑1‑磷酸合成昆布寡糖的反应条件进行优化、调整,获得了具有不同聚合度及生物活性的昆布寡糖,开发出了一种新型的可制备不同聚合度且具有生物活性昆布寡糖的工艺方法。本发明还进一步开发了以玉米秸秆为底物,先制备G1P,再通过调整底物浓度,利用昆布寡糖磷酸化酶合成特定聚合度及功能活性的昆布寡糖的工艺方法。该方法中使用的原料为秸秆,来源丰富、价格低廉,且由玉米秸秆制备的葡萄糖和G1P在THA_1941的催化下可高效合成特定聚合度的功能性昆布寡糖,具有合成效率高、绿色环保的特点。

    一种Cblac-Mut8漆酶突变体
    14.
    发明授权

    公开(公告)号:CN114606209B

    公开(公告)日:2023-09-29

    申请号:CN202011399467.X

    申请日:2020-12-04

    Abstract: 本申请属于酶工程技术领域,具体涉及一种热稳定性高的突变体Cblac‑Mut8漆酶。本发明通过设计得到一种热稳定性强的突变体Cblac‑Mut8漆酶;经酶学性质研究,该酶最适温度为60℃,最适pH=4.0。在50℃时,Cblac‑Mut8酶活半衰期达到48h以上;在60℃时,Cblac‑Mut8酶活半衰期也可达到26.6h。而且,与Cblac漆酶(WT)相比,50℃时突变体Cblac‑Mut8的催化活性(kcat/Km)比WT提高了9.5倍,对于温度的耐受性更强,催化活性更高。本发明的技术效果与现有技术相比,所得突变体Cblac‑Mut8对孔雀石绿的降解能力强于大多数已报到漆酶,是一种具有很高工业应用前景的漆酶。

    从木质纤维素原料中高效提取木质素的方法

    公开(公告)号:CN111116938A

    公开(公告)日:2020-05-08

    申请号:CN202010013392.0

    申请日:2020-01-07

    Abstract: 本发明属于木质素分离提取技术领域,具体涉及从木质纤维素原料中高效提取木质素的方法。所述方法包括以下步骤:将木质纤维素原料置于芬顿反应预处理体系中,处理6~72h;然后利用磨木法或者碱法对上述原料中的木质素进行分离提取;所述芬顿反应预处理体系为由亚铁化合物3~9mmol/L、过氧化物0.2~1.6mol/L、巯基化合物0~0.128mol/L组成的混合溶液。通过利用优化后的芬顿催化反应来促进木质纤维素原料中木质素的分离,从而得到结构更完整、分子量分布更集中的木质素,并能有效提高木质素的提取率。

    基于纳米四氧化三铁的木质纤维素预处理体系及其应用

    公开(公告)号:CN111118080B

    公开(公告)日:2022-11-15

    申请号:CN202010013540.9

    申请日:2020-01-07

    Abstract: 本发明属于木质纤维素预处理技术领域,具体涉及基于纳米Fe3O4的木质纤维素预处理体系及其应用。所述预处理体系的有效成分由以下组分组成:Fe3O40.1~4g/L,过氧化合物0.1~5mol/L,巯基化合物0~0.05mol/L;所述过氧化物为过氧化氢或过氧化钠中任一种或两种混合物;所述巯基化合物为巯基乙酸、巯基丙酸、巯基乙酸酯、巯基丙酸酯中任一种或两种任意比例的混合物。利用纳米Fe3O4将芬顿催化反应与木质纤维素降解相结合,克服了现有技术中芬顿催化反应中铁盐不能回收利用的问题,有效提高了木质纤维素的降解效率,降低了芬顿催化反应的成本。

    一种热稳定性高的突变体Cblac-Mut8漆酶

    公开(公告)号:CN114606209A

    公开(公告)日:2022-06-10

    申请号:CN202011399467.X

    申请日:2020-12-04

    Abstract: 本申请属于酶工程技术领域,具体涉及一种热稳定性高的突变体Cblac‑Mut8漆酶。本发明通过设计得到一种热稳定性强的突变体Cblac‑Mut8漆酶;经酶学性质研究,该酶最适温度为60℃,最适pH=4.0。在50℃时,Cblac‑Mut8酶活半衰期达到48h以上;在60℃时,Cblac‑Mut8酶活半衰期也可达到26.6h。而且,与Cblac漆酶(WT)相比,50℃时突变体Cblac‑Mut8的催化活性(kcat/Km)比WT提高了9.5倍,对于温度的耐受性更强,催化活性更高。本发明的技术效果与现有技术相比,所得突变体Cblac‑Mut8对孔雀石绿的降解能力强于大多数已报到漆酶,是一种具有很高工业应用前景的漆酶。

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