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公开(公告)号：CN118853411A
公开(公告)日：2024-10-29
申请号：CN202310482743.6
申请日：2023-04-28
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种构建兔大型艾美耳球虫ALI体外培养模型的方法，本发明提供的构建方法，通过分离兔回肠隐窝，经过类器官培养获得大量具有干性的肠道细胞，将兔回肠类器官转移至细胞培养板上实现单层肠道细胞的ALI体外培养，再感染大型艾美耳球虫子孢子，通过模拟兔肠道的体内环境，从而实现大型艾美耳球虫的体外培养。本发明提供的兔回肠ALI体外培养模型在感染大型艾美耳球虫子孢子后144HPI仍具有细胞活性，且大型艾美耳球虫可发育至裂殖体阶段，相较于球虫常用的MDBK细胞体外培养模型，该模型可以为大型艾美耳球虫提供更为长期的生长发育需求，对于大型艾美耳球虫分子层面和免疫相关的研究具有重要意义。
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公开(公告)号：CN114933970B
公开(公告)日：2023-03-24
申请号：CN202210723393.3
申请日：2022-06-24
Applicant: 华南农业大学 , 岭南现代农业科学与技术广东省实验室
IPC: C12N1/11 , C12N15/53 , C12N15/113 , C12N15/55 , C12N15/79 , A61K39/002 , A61P33/02 , C12R1/90
Abstract: 本发明公开了一种弓形虫基因敲除虫株，该虫株缺失核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的弓形虫6‑磷酸葡萄糖酸脱氢酶1基因(Tg6PGDH1)。本发明还公开了该虫株的构建方法以及在制备弓形虫疫苗中的应用。所述弓形虫基因敲除虫株在体外可以正常培养，虫体可以正常生长复制，但是在体内毒力减弱且对动物具有很高的免疫保护力，有成为抗弓形虫基因工程疫苗的潜力。
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公开(公告)号：CN114933970A
公开(公告)日：2022-08-23
申请号：CN202210723393.3
申请日：2022-06-24
Applicant: 华南农业大学 , 岭南现代农业科学与技术广东省实验室
IPC: C12N1/11 , C12N15/53 , C12N15/113 , C12N15/55 , C12N15/79 , A61K39/002 , A61P33/02 , C12R1/90
Abstract: 本发明公开了一种弓形虫基因敲除虫株，该虫株缺失核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的弓形虫6‑磷酸葡萄糖酸脱氢酶1基因(Tg6PGDH1)。本发明还公开了该虫株的构建方法以及在制备弓形虫疫苗中的应用。所述弓形虫基因敲除虫株在体外可以正常培养，虫体可以正常生长复制，但是在体内毒力减弱且对动物具有很高的免疫保护力，有成为抗弓形虫基因工程疫苗的潜力。
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公开(公告)号：CN109136386B
公开(公告)日：2021-12-24
申请号：CN201810828293.0
申请日：2018-07-25
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种对卡耶塔环孢子虫进行快速分型和溯源的定量PCR方法，采用卡耶塔环孢子虫线粒体基因组不同拷贝间的多态性连接区域作为遗传标记，设计了特异性的定量PCR引物，包含上游引物Cyc‑Mito‑F1和下游引物Cyc‑Mito‑R1，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：1～2所示。本发明方法克服了现有的卡耶塔环孢子虫单位点分子诊断工具无法对该病原进行精细分型的缺点，而且扩增效率比现有的单位点分子诊断工具高；本发明采用卡耶塔环孢子虫线粒体基因组上的单个位点定量PCR和熔解曲线分析就可进行快速的基因型区分和溯源，克服了现有的卡耶塔环孢子虫多位点序列分型工具中因需要对多个位点扩增和测序所导致的分型耗时长、成本高的缺点，具有较大的应用前景。
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公开(公告)号：CN112724223A
公开(公告)日：2021-04-30
申请号：CN202011588887.2
申请日：2020-12-28
Applicant: 华南农业大学
IPC: C07K14/44 , C12N15/30 , C12N15/70 , C12N1/21 , C07K16/20 , G01N33/533 , G01N33/577 , G01N33/569 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种毕氏肠微孢子虫孢壁蛋白单克隆抗体的制备及其应用。基于重组蛋白EbSWP1制得的单克隆抗体对于检测毕氏肠微孢子虫具有良好的特异性，不与虾肝肠微孢子虫、兔脑炎微孢子虫、大肠杆菌等发生反应。本发明制备的单克隆抗体可与荧光素标记物偶联制得免疫荧光抗体，利用该抗体与环境、粪便中的毕氏肠微孢子虫做直接免疫荧光反应，可以快速、灵敏、准确地检验毕氏肠微孢子虫。与实验室最常用的PCR检测方法相比，本发明的免疫荧光检测方法操作简便，耗费时间短，且检测准确度高，以PCR结果为参考，本发明检测方法的准确率高于85％，该方法简便、快速、灵敏、准确的特点使其适用于基层检测应用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111154792A
公开(公告)日：2020-05-15
申请号：CN202010027841.7
申请日：2020-01-10
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种隐孢子虫蛋白激酶660C端蛋白的制备及其应用，包括如下步骤：S1.以SEQ ID NO：1～2所示扩增引物PCR扩增反应得到Cp660C基因片段；S2.将Cp660C基因片段与原核表达质粒双酶切，连接，得到Cp660C重组质粒；S3.将Cp660C重组质粒转入表达宿主菌，挑取阳性克隆菌；S4.将阳性克隆菌扩大培养至生长对数期，诱导表达；S5.诱导表达后的菌液，冷冻离心收集菌体，弃上清，清洗菌体后重悬，添加蛋白酶抑制剂，冰浴超声裂解菌体，得裂解液，再低温离心取上清，滤膜过滤；S6.取步骤过滤后上清液经Ni柱纯化，洗脱，收集目的蛋白。本发明方法能够得到高纯度、高抗原特异性的重组蛋白，所纯化得到的蛋白能够进一步用于隐孢子虫蛋白功能性分析研究。
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公开(公告)号：CN118086351B
公开(公告)日：2024-08-23
申请号：CN202410133765.6
申请日：2024-01-30
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了缺失60kDa糖蛋白基因的微小隐孢子虫基因缺失虫株及其应用。本发明提供一种微小隐孢子虫GP60基因缺失虫株及其构建方法，通过基因编辑技术缺失60kDa糖蛋白GP60基因成功构建微小隐孢子虫基因缺失虫株。研究显示，在野生型微小隐孢子虫IIdA20G1亚型虫株缺失GP60基因后，仍然可以体外培养，其体外生长荷虫量明显降低，并且该基因缺失虫株的毒力减弱，在小鼠体内荷虫量也显著降低，卵囊排泄强度明显减弱，不会造成感染后GKO小鼠死亡，具有毒力显著减弱的优点，能够用于制备微小隐孢子虫弱毒疫苗，用于预防微小隐孢子虫感染。
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公开(公告)号：CN118440972A
公开(公告)日：2024-08-06
申请号：CN202410507411.3
申请日：2024-04-25
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了缺失25kDa黏蛋白CpMuc25基因的微小隐孢子虫基因敲除虫株及其应用。本发明研究显示CpMuc25基因与虫体毒力相关，作为靶点能用于在筛选或制备抗微小隐孢子虫病的药物；本发明提供一种微小隐孢子虫CpMuc25基因敲除虫株，通过基因编辑技术缺失25kDa黏蛋白CpMuc25基因成功构建得到；在野生型微小隐孢子虫IIdA20G1亚型虫株敲除CpMuc25基因后，仍然可以体外培养，其体外生长速度减缓，进行体内免疫后，感染后的小鼠临床症状减轻，致死时间滞后，致死率显著降低，具有毒力减弱的优点，能用于制备抗微小隐孢子虫药物预防微小隐孢子虫感染。
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公开(公告)号：CN118360157A
公开(公告)日：2024-07-19
申请号：CN202410336425.3
申请日：2024-03-22
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N1/11 , C12N15/85 , C12N15/52 , C12N9/22 , C12N15/113 , A61K39/002 , A61P33/02 , C12R1/90
Abstract: 本发明公开了一株弓形虫琥珀酰辅酶A合成酶α亚基基因缺失疫苗虫株及其应用。本发明提供一株弓形虫基因缺失疫苗虫株(Δscsα)，该虫株通过基因编辑技术敲除弓形虫琥珀酰辅酶A合成酶α亚基(TgSCSα)基因得到；弓形虫敲除TgSCSα后在体外仍可培养、在体内具有几乎无毒的特性；动物免疫接种Δscsα后，能够产生良好的免疫保护力，有效抵抗野生型弓形虫的感染。TgSCSα具有作为弓形虫疫苗设计靶点的潜力，能用于制备弓形虫基因缺失疫苗虫株。Δscsα是一株具备良好应用前景的候选疫苗虫株，可以为弓形虫病的防控提供更多选择和策略。
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公开(公告)号：CN118086351A
公开(公告)日：2024-05-28
申请号：CN202410133765.6
申请日：2024-01-30
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了缺失60kDa糖蛋白基因的微小隐孢子虫基因缺失虫株及其应用。本发明提供一种微小隐孢子虫GP60基因缺失虫株及其构建方法，通过基因编辑技术缺失60kDa糖蛋白GP60基因成功构建微小隐孢子虫基因缺失虫株。研究显示，在野生型微小隐孢子虫IIdA20G1亚型虫株缺失GP60基因后，仍然可以体外培养，其体外生长荷虫量明显降低，并且该基因缺失虫株的毒力减弱，在小鼠体内荷虫量也显著降低，卵囊排泄强度明显减弱，不会造成感染后GKO小鼠死亡，具有毒力显著减弱的优点，能够用于制备微小隐孢子虫弱毒疫苗，用于预防微小隐孢子虫感染。
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