公开(公告)号：CN108179198A

公开(公告)日：2018-06-19

申请号：CN201810068583.X

申请日：2018-01-24

Applicant: 扬州大学

Inventor： 宋成义 ,  王伟 ,  陈才 ,  张丽 ,  沈丹 ,  王赛赛 ,  王宵燕 ,  高波

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6858

Abstract: 本发明涉及一种基于LINE1转座子与微卫星引物相结合的猪基因组分子标记挖掘方法。该方法是利用LINE1的5’端核苷酸序列或3’端核苷酸序列设计特异性引物；同时根据生物信息学分析获得的猪的基因组中分布较广泛的微卫星序列设计微卫星引物；两种引物结合，以不同品种猪的基因组为模板扩增；筛选比较清晰、多态性高，重复性好的扩增条带，克隆测序；将测序结果比对分析，设计旁侧特异性引物与反转录转座子LINE1特异性引物组合，再利用所得的待验证分子标记引物PCR扩增多个品种不同个体基因组样品，选取能清晰扩出条带且有多态性的引物组合，获得分子标记。本发明可以为猪的品系鉴定，育种中的标记辅助选择提供有用的分子标记。

公开(公告)号：CN107523633A

公开(公告)日：2017-12-29

申请号：CN201710928980.5

申请日：2017-10-09

Applicant: 扬州大学

Inventor： 宋成义 ,  陈才 ,  王伟 ,  杨昆仑 ,  张丽 ,  沈丹 ,  王赛赛 ,  王宵燕 ,  高波

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/10 ,  G06F19/22

CPC classification number: C12Q1/6806 ,  C12Q1/6888 ,  C12Q2600/124 ,  C12Q2600/156 ,  G16B30/00 ,  C12Q2531/113

Abstract: 本发明涉及分子生物学和生物信息学领域，具体涉及一种基于猪SINE转座子插入多态性研发新型分子标记的方法。该方法是利用SINE的核苷酸序列作为查询序列，在猪公开的基因组寻找插入位点；根据寻找到的每个插入位点，分别向上、下游延伸300-500个核苷酸序列，下载每条序列；将获得的序列去除冗余；根据获得的序列信息设计检测引物；利用所得的待验证分子标记引物PCR扩增不同品种，或同一品种不同个体基因组样品，选取能清晰扩出条带且有多态性的引物组合，获得分子标记。本发明方法可以为猪的品系鉴定，育种中的标记辅助选择提供有用的分子标记。

公开(公告)号：CN101289671B

公开(公告)日：2010-12-22

申请号：CN200810123956.5

申请日：2008-05-30

Applicant: 扬州大学

Inventor： 宋成义 ,  高波 ,  谢飞 ,  王宵燕 ,  陈国宏 ,  孙丽亚 ,  赵芹 ,  吴晗

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/89 ,  C12N15/90 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种转基因动物的制备方法。具体是先构建含目标基因cDNA的转基因表达盒，再将其插入睡美人转座子载体中获得含转基因表达盒的睡美人转座子表达载体，然后使用睡美人转座系统介导，采用双侧睾丸多点注射法，将含转基因表达盒的睡美人转座子表达质粒和睡美人转座酶表达质粒注射雄性动物体内；再与雌性动物交配，动物分娩后，利用聚合酶链式反应和Southern印迹技术分析确定转基因阳性个体。本发明在转基因动物的制备过程中使用“睡美人”转座系统介导，采用双侧睾丸三次多点注射法，所建立的转基因动物制备方法具有阳性率高、节省时间、试验成本低、实用、操作简单等优势。