公开(公告)号：CN109959551A

公开(公告)日：2019-07-02

申请号：CN201910149359.8

申请日：2019-02-28

Applicant: 华东理工大学 ,  华南农业大学

Inventor： 冯耀宇 ,  黄成琛 ,  王元非 ,  李娜 ,  郭亚琼

IPC: G01N1/40

Abstract: 本发明涉及一种采用絮凝技术富集水样中寄生虫卵(孢)囊的方法，包括采集水样；水样中加入絮凝剂，其体积是水样体积的1％‑3％，絮凝剂为摩尔浓度均介于0.5‑1.5mol/L之间的CaCl2水溶液和NaHCO3水溶液，将加入絮凝剂后的水样的pH值调至10±0.1，静置形成第一沉淀；第一沉淀中加入氨基磺酸溶液，离心分离后得第二沉淀，第二沉淀中加入杜氏磷酸盐缓冲液，离心分离后得富集有寄生虫卵(孢)囊的离心沉淀，杂质溶解于氨基磺酸溶液和/或杜氏磷酸盐缓冲液中被去除。本发明还涉及其在寄生虫卵(孢)囊检测中的应用。根据本发明的方法，应用简便、快速，便于后续检测，避免了现有技术中富集操作复杂并引起误差的问题。

公开(公告)号：CN109735513A

公开(公告)日：2019-05-10

申请号：CN201811497728.4

申请日：2018-12-07

Applicant: 华东理工大学 ,  华南农业大学

Inventor： 冯耀宇 ,  苏嘉缘 ,  张强 ,  李娜 ,  郭亚琼

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21

Abstract: 本发明公开了一种隐孢子虫蛋白激酶的纯化方法，先通过构建隐孢子虫蛋白激酶的体外重组表达载体，再进行质粒转导、IPTG低温诱导表达，成功表达后的菌体裂解后，经割胶回收纯化蛋白；本发明纯化方法通过低温诱导以及改善IPTG浓度的方式，提高了表达蛋白的可溶性，同时通过割胶回收的方法解决了隐孢子虫蛋白激酶在体外表达中易出现的自切降解包涵体表达等问题，能够得到高纯度条带单一且具备酶学活性的重组蛋白，并且能够提高对难以表达、分子量较大蛋白的纯化效果。所纯化得到的蛋白能够进一步用于功能性分析研究，为解决隐孢子虫蛋白功能领域的诸多问题奠定基础。

公开(公告)号：CN109136386A

公开(公告)日：2019-01-04

申请号：CN201810828293.0

申请日：2018-07-25

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 冯耀宇 ,  郭亚琼 ,  李娜 ,  王元非

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6851 ,  C12N15/11

CPC classification number: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6851 ,  C12Q2531/113 ,  C12Q2563/107

Abstract: 本发明公开了一种对卡耶塔环孢子虫进行快速分型和溯源的定量PCR方法，采用卡耶塔环孢子虫线粒体基因组不同拷贝间的多态性连接区域作为遗传标记，设计了特异性的定量PCR引物，包含上游引物Cyc‑Mito‑F1和下游引物Cyc‑Mito‑R1，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：1～2所示。本发明方法克服了现有的卡耶塔环孢子虫单位点分子诊断工具无法对该病原进行精细分型的缺点，而且扩增效率比现有的单位点分子诊断工具高；本发明采用卡耶塔环孢子虫线粒体基因组上的单个位点定量PCR和熔解曲线分析就可进行快速的基因型区分和溯源，克服了现有的卡耶塔环孢子虫多位点序列分型工具中因需要对多个位点扩增和测序所导致的分型耗时长、成本高的缺点，具有较大的应用前景。