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公开(公告)号：CN114250189A
公开(公告)日：2022-03-29
申请号：CN202111490749.5
申请日：2021-12-08
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/31 , C07K14/315 , C12N15/60 , C12N15/52 , C12Q1/18 , G01N33/68 , A61K35/74 , A61K38/16 , A61P31/04 , A23L33/135 , A23L33/18 , C12R1/19 , C12R1/46
Abstract: 本发明公开了一种合成乳链菌肽Nisin的异源表达体系及其应用，属于生物工程技术领域。本发明提供了一种重组大肠杆菌，所述重组大肠杆菌采用pRSFDuet‑1载体过表达了乳酸链球菌素前体肽nisA和修饰蛋白nisB，同时采用pACYCDuet‑1载体过表达了修饰蛋白nisC。本发明提供了一种Nisin在大肠杆菌异源表达的方法，该方法利用大肠杆菌自身对Nisin的抗性，实现了Nisin的组成型表达，从而脱离了宿主代谢和基因表达的双重调节，降低了后期的改在难度，有潜力提高Nisin的产量并降低生产成本，为开发新型Nisin高水平合成系统提供了可行方案。
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公开(公告)号：CN114107309A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111391569.1
申请日：2021-11-19
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/115 , C12N15/75 , C12N15/67 , C12N1/21 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种非天然茶碱RNA分子开关，属于基因工程技术领域。本发明通过设计随机序列获得一系列非天然茶碱核糖开关，以绿色荧光蛋白基因为目的基因，通过对本底荧光强度/OD600、诱导后荧光强度/OD600和诱导率三个指标综合评价筛选，得到了一种可调控外源蛋白表达的茶碱核糖开关2nt。当茶碱核糖开关2nt与启动子P43组合时，诱导水平高与不含有茶碱核糖开关的表达水平相近，诱导率达到6.5倍。当以天冬氨酶和β‑葡糖醛酸苷酶基因为目的基因时，加入4mM茶碱溶液，可以使两种酶均成功受诱导而表达。该过程中不需要其他蛋白因子的参与，并且能够有效快速地实现基因调控。
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公开(公告)号：CN114107270A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111485153.6
申请日：2021-12-07
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种L‑天冬氨酸β‑脱羧酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明的L‑天冬氨酸β‑脱羧酶突变体E88R的比酶活相对野生型提高了2.1倍，比酶活达481±3.7U/mg。突变体E88R在50℃处理30分钟仍有59％残留酶活性，在pH 7.0和pH 8.0条件下，残余酶活分别为88％和82％。相比野生型酶，该突变体酶E88R的热稳定性与pH稳定性都有很大的提高，有利于以后的工业生产。在pH 7.5条件下，突变体E88R比酶活达到199±2.1U/mg，比野生型高1.9倍。以2.5M马来酸作为底物，全细胞催化制备L‑丙氨酸，生产速率达35.66g/(L·h)，比野生型提高1.68倍。
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公开(公告)号：CN113846040A
公开(公告)日：2021-12-28
申请号：CN202111060419.2
申请日：2021-09-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了协同两类腈水合酶高效催化烟酰胺及丙烯酰胺生物合成的方法，属于生物工程领域。本发明构建了一种基因工程菌，兼具高分子量腈水合酶对腈类物质和酰胺类物质有较高的耐受性，和，低分子量腈水合酶相仿的反应速率，能够高效生产烟酰胺及丙烯酰胺。本发明通过全细胞催化法，以烟腈及丙烯腈为底物，添加终浓度OD600值为8的基因工程菌，催化生成附加值更高的烟酰胺及丙烯酰胺，烟酰胺产量可达375～516g/L，丙烯酰胺产量达到240.8g/L。
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公开(公告)号：CN112501151B
公开(公告)日：2021-11-16
申请号：CN202011450515.3
申请日：2020-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种腈水合酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明对腈水合酶氨基酸基序中β亚基上的第48号构建的单点突变体L48D和L48H的酶活分别为750.26±1.63U/mg、820.01±0.98U/mg，与未进行改造的野生型腈水合酶的比酶活220.30±2.28U/mg相比，都有明显的提高。其中，突变体L48D与突变体L48H的酶活分别为野生型的3.4和3.7倍。上述这两个氨基酸残基的突变显著改善腈水合酶催化活性，有利于应用于工业上精细化学品如烟酰胺的生产，提高催化效率，降低生产成本。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112553236A
公开(公告)日：2021-03-26
申请号：CN202011449745.8
申请日：2020-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于异源群体感应的高效表达系统，属于基因工程技术领域。本发明通过将金黄色葡萄球菌的agr群体感应系统中的agrA、agrB、agrC和agrD基因异源构建至枯草芽孢杆菌168基因组，将P3启动子克隆至穿梭载体，进而构建相配套的宿主和表达质粒。使用绿色荧光蛋白sfGFP作为报告基因，证明该系统可以高效表达外源蛋白，且不需要额外添加诱导剂。分别对P3启动子在RepA、RepB和RepF复制类型质粒上的蛋白表达水平进行检测，表明其与强组成型启动子P43和PylbP相比，在RepA和RepF复制类型质粒上具有超高的活性。
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公开(公告)号：CN110016459B
公开(公告)日：2021-03-19
申请号：CN201910355173.8
申请日：2019-04-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种生产β‑丙氨酸的重组大肠杆菌及其厌氧发酵的方法，属于代谢工程领域。本发明构建得到的菌株B0016‑083BB/pPL‑panD、B0016‑100BB/pPL‑panD、B0016‑110BB/pPL‑panD厌氧发酵生产β‑丙氨酸的产量分别为57.55×10‑3g/L、58.37×10‑3g/L、80.31×10‑3g/L，较出发菌株B0016‑080BB/pPL‑panD分别提高到142.62％、146.41％和238.82％。本发明首次利用厌氧发酵生产β‑丙氨酸，与好氧发酵相比，理论转化率更高，副产物更少，且避免了好氧发酵中所需通气搅拌，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN112481265A
公开(公告)日：2021-03-12
申请号：CN202011451933.4
申请日：2020-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了枯草芽孢杆菌人工终止子及其应用，属于基因工程技术领域。本发明首先对不同的终止子的活性进行表征，接下来使用不同终止子测定平台对终止子的终止次效率进行测定，得到了一系列可提高目的蛋白产量的新型终止子，以绿色荧光蛋白基因作为终止子上游基因，以红色荧光蛋白基因作为终止子下游基因，表征终止子对上下游基因的调控水平。结果表明，这些新型终止子对于提高上游基因表达量和抑制下游基因表达量都有良好的效果。将一系列不同终止子应用于纳豆激酶和普鲁兰酶重组蛋白表达中，结果表明，这些终止子有助于提高蛋白的酶活和蛋白表达量的提升，这对在枯草芽孢杆菌中生产目的蛋白具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN109251882B
公开(公告)日：2020-12-29
申请号：CN201811438328.6
申请日：2018-11-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株异源表达耐热腈水合酶的大肠杆菌重组菌及其应用，属于生物工程领域。本发明通过构建重组大肠杆菌，获得具有高腈水合酶酶活的大肠杆菌重组菌株，发酵得到的重组腈水合酶具有更好的热稳定性。另外，可以此大肠杆菌重组菌株为催化剂，以烟腈或丙烯腈为底物，进行全细胞催化反应制备烟酰胺或丙烯酰胺。此法与化学生产法相比，生产工艺安全清洁，无环境污染，与酶法相比，底物价格便宜，简化了产物的分离纯化步骤，催化效率高，终产物烟酰胺或丙烯酰胺产率95％以上。
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公开(公告)号：CN109355276B
公开(公告)日：2020-08-04
申请号：CN201811426687.X
申请日：2018-11-27
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种普鲁兰酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明构建了一种普鲁兰酶突变体，得到的单突变体K419R(第419位赖氨酸突变为精氨酸)的酶活是野生型的1.3，67℃保温30min剩余酶活达67.3U/mg；迭代突变体K419R+Y102C+K383C(第419位赖氨酸突变为精氨酸，第102位酪氨酸和第383位赖氨酸分别突变为半胱氨酸)的酶活提高为野生型的2倍，在67℃保温30min剩余酶活达88.3U/mg，为保温前的43.1％，具有较好的热稳定性。本发明的普鲁兰酶突变体能够应用于淀粉糖化过程。
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