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公开(公告)号：CN113252658A
公开(公告)日：2021-08-13
申请号：CN202110716945.3
申请日：2021-06-28
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于金纳米识别适配体冗余碱基的方法，以展青霉素PAT原始适配体链为例。其中PAT原始适配体序列是本申请人首次发现的PAT高亲和性核酸序列，在此基础上利用DNA结构预测软件mfold预测78‑mer的PAT适配体的二级结构，通过逐渐剔除侧翼碱基得到一系列截短适配体。然后，依据适配体与金纳米和靶标PAT之间的亲和力不同，通过在高盐条件下金纳米无核酸序列保护会发生聚沉伴随颜色变化，进而实现适配体冗余碱基的识别。同时结合定点突变和圆二色谱技术（CD）确定了PAT适配体的冗余碱基和核心序列。本申请利用AuNPs比色法具有肉眼可判定、不需要大型仪器设备的优势，可以扩展应用于其他的靶标适配体的截短研究。
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公开(公告)号：CN113249449A
公开(公告)日：2021-08-13
申请号：CN202110718435.X
申请日：2021-06-28
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12Q1/6851
Abstract: 本发明公开了一种基于延伸发光引物的实时定量PCR测定Kd值的方法。以展青霉素PAT为例，采用单一荧光基团标记，基于配体‑受体相互作用来测定PAT与截短核酸适配体之间的亲和常数Kd。本发明首次构建了基于延伸发光引物的实时定量PCR方法并应用于Kd值的检测，利用引物核酸构型的变化实现荧光信号的放大。本发明与已公布的Kd值测量方法比较结果证实本方法测得Kd值的有效性。依托本方法测定，本发明简单归纳出PAT适配体冗余序列截短导致的解离常数Kd值的变化规律。本发明极大地降低了普通Kd值测定方法的成本费用，并且易操作，可行性强，为适配体Kd值的测量提供了一个新的方法。
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公开(公告)号：CN113174388A
公开(公告)日：2021-07-27
申请号：CN202110715709.X
申请日：2021-06-28
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了一种功能核酸纳米杆与功能核酸纳米花的制备及形貌转换方法。以PCR反应处于指数扩增期的扩增子为模板可以制备得到双链的功能核酸纳米杆，且通过焦磷酸根的调控可以实现从功能核酸纳米杆到功能核酸纳米花的形貌转换；以PCR反应处于平台期的扩增子为模板可以制备得到双链的功能核酸纳米花，通过纯化去除焦磷酸镁可以实现从功能核酸纳米花到功能核酸纳米杆的形貌转换。本发明制备的双链功能核酸纳米材料，其成本低廉、制备方法简单，非常适用于不同形貌纳米材料的商业化制备与应用。
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公开(公告)号：CN109321672B
公开(公告)日：2021-07-06
申请号：CN201811279725.3
申请日：2018-10-30
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/686 , C12N15/11
Abstract: 本申请公开了一种核苷酸组合物和包含该核苷酸的试剂盒及检测方法。当待测样品中包含待测目标分子时，利用本发明设计的组合物二和引物对通过非对称PCR反应，可获得大量单链产物，这些单链产物可与利用本发明设计的组合物一制备好的银纳米簇探针杂交结合后会发出荧光，从而实现待测目标分子的可视性检测，本发明克服传统方法依赖于仪器判别的缺点，建立一种不依赖于复杂仪器的可视化、可定性定量的检测新方法，丰富了现有检测技术和方法，为以后银纳米簇在转基因方面的应用提供了思路和技术基础。在一个具体的实施方式中，本发明建立的组合物和方法的灵敏度达到0.5ng/μL且重复性好、特异性高。
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公开(公告)号：CN108676844B
公开(公告)日：2021-04-06
申请号：CN201810510442.9
申请日：2018-05-24
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明提供了一种双酶放大汞离子生物传感器的构建。本发明传感器，根据汞离子与胸腺嘧啶之间可以形成配位键，使得核酸双链之间形成稳定的平末端，激活外切酶Ⅲ(ExoⅢ)，切割平末端的3’端，使得核酸链的3’‑OH端暴露。而末端脱氧核糖转移酶(TdT)在3’‑OH端暴露、无模板的情况下就可以进行链的延伸，通过控制核酸体系中脱氧核糖的配比就可以产生大量的富G序列，富G序列在TMB存在的情况下显色，完成对Hg2+的比色定量检测。在一个具体的实施例中，本发明传感器的检出限为0.2nmol/L、加标回收率在98.75％‑103％。本发明所述传感器及Hg2+检测方法，是一种新的、廉价、快速、灵敏、特异性强、准确度高的产品及方法，丰富了现有检测技术或方法，为新的检测产品或方法的研发提供了思路。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112587670A
公开(公告)日：2021-04-02
申请号：CN202110227528.2
申请日：2021-03-02
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了靶向调控能量代谢的DNA纳米花药物及其制备方法与应用，该药物由脂肪细胞靶向的DNA纳米花NF（Nano Flowers）和大蒜素A（Allicin）组成。大蒜素通过多种相互作用力与核酸发生作用并结合在DNA纳米花表面；生成的DNA纳米花具有脂肪细胞靶向性和大蒜素高效装载能力。本发明的DNA纳米花药物，对脂肪细胞有很好的靶向性，相比较于单链DNA适配体，形成的DNA纳米花对脂肪细胞的靶向能力更强且稳定性更高，可以特异性的进入脂肪细胞；而大蒜素具有很好的调节能量代谢能力，可调控白色脂肪棕色化，两者结合后，可以特异性的递送大蒜素进入脂肪细胞，因而构建的DNA纳米花药物可以起到靶向到肥胖组织精准调控能量代谢的目的且具有较高的生物安全性。
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公开(公告)号：CN110257466A
公开(公告)日：2019-09-20
申请号：CN201910604609.2
申请日：2019-07-05
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明涉及分子生物学技术领域，特别涉及一种将重金属汞微生物传感器细胞固定在滤纸片上的方法。该方法主要涉及将微生物细胞传感器细胞预处理，加入干燥保护剂重新悬浮微生物传感器细胞，将悬浮液滴加在滤纸片上并进行干燥处理。本方法可以将检测重金属的微生物全细胞传感器制成试纸条，提高此类微生物传感器的便携性，并摆脱对荧光测定仪器的限制，实现肉眼可视化检测。
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公开(公告)号：CN110006888A
公开(公告)日：2019-07-12
申请号：CN201910389106.8
申请日：2019-05-10
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明涉及一种基于单原子纳米酶的抗坏血酸快速检测试纸，属于食品安全检测领域。以单原子纳米酶为催化剂，以3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)和过氧化氢(H2O2)混合溶液为显色剂，以3mm滤纸为载体，以乙醇-Nafion为缓冲体系，所制备的试纸能够在5分钟内对样品中所含抗坏血酸浓度进行快速检测，非常适宜于监管部门现场检测和即时监测。
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公开(公告)号：CN108410956A
公开(公告)日：2018-08-17
申请号：CN201810206239.2
申请日：2018-03-13
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12Q1/6895
Abstract: 本发明提供了一种多重数字PCR检测方法及引物、探针和试剂盒。本发明将通用引物与多重数字PCR进行结合应用，开发出了一种新的核酸检测方法，至少实现了微量、灵敏、精准度高的高通量多重核酸的检测特别是转基因的检测。此外，本发明通过对通用引物种类、浓度以及各修饰特异引物浓度等因素进行优化，建立了一套通量高、特异性强的多重转基因成分筛查检测体系或试剂盒。通过对该体系特异性的验证，确保该检测体系可以满足我国进口口岸的各类转基因成分检测的需要。
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公开(公告)号：CN107449897A
公开(公告)日：2017-12-08
申请号：CN201710624765.6
申请日：2017-07-27
Applicant: 中国农业大学
IPC: G01N33/531 , G01N33/558
CPC classification number: G01N33/531 , G01N33/558
Abstract: 本发明公开了一种核酸适配体修饰金纳米星的制备方法及应用，制备方法包括：依次将dATP溶液和十二烷基硫酸钠溶液加入到金纳米星溶液中震荡孵育，随后分多次间隔加入氯化钠溶液调整离子强度，再加入巯基修饰的核酸适配体孵育修饰，最后离心获得核酸适配体修饰金纳米星沉淀；其在农药残留检测中的应用是通过组装基于“竞争法”的层析试纸条，通过检测核酸适配体修饰金纳米星的结合对象，判断得到农药残留结果。本发明所提供的方法能高效快捷制备核酸适配体修饰金纳米星，且所得核酸适配体修饰金纳米星稳定性好，生物活性高；所提供的层析试纸条用于农药的残留检测的方法理论可靠，设计科学合理，检测简便快速，效率高，应用前景广阔。
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