一种快速筛选抗除草剂水稻种质的方法、CAPS分子标记及其应用

    公开(公告)号:CN119351600A

    公开(公告)日:2025-01-24

    申请号:CN202411494402.1

    申请日:2024-10-24

    Abstract: 本发明涉及水稻筛选分子标记技术领域,具体涉及一种快速筛选抗除草剂水稻种质的方法、CAPS分子标记及其应用。方法包括以下步骤:提取待测水稻种质植株的基因组DNA;以基因组DNA为模板,利用引物进行PCR、酶切后,检测是否含有89bp、171bp和260bp的条带,当仅含有260bp的条带时,对应待测水稻种质为非抗除草剂水稻,当含有89bp和171bp的两条条带时,对应待测水稻种质为抗除草剂水稻;本发明通过检测CAPS分子标记检测基因型,对水稻除草剂抗性进行鉴定和预测,避免了环境因子对表型鉴定的不利影响,且本发明PCR扩增稳定,检测准确度大大提高。

    提高引导编辑效率的融合蛋白表达框及相应骨架载体和应用

    公开(公告)号:CN116814677A

    公开(公告)日:2023-09-29

    申请号:CN202310793261.2

    申请日:2023-06-30

    Abstract: 本发明公开了一种提高引导编辑效率的融合蛋白表达框及相应骨架载体和应用。本发明的骨干载体包括PE融合蛋白、pegRNA;所述融合蛋白为Cas9切刻酶或其变体、反转录酶和MLH基因破坏域序列组成的融合蛋白。pegRNA包含靶向目的DNA片段的sgRNA、逆转录模板和引物结合位点、连接得到的RNA分子。本发明所述骨干质粒载体中,融合蛋白和pegRNA表达框表达框位于同一双元载体中,Cas9核酸酶表达框由ZmUBI启动子,融合蛋白编码序列和35s终止子依次构成;pegRNA表达框依次由35S‑CmYLCV‑U6复合启动子、tRNA基因序列、壮观霉素抗性基因SpR、RNA核酶HDV序列、EQ序列和polyT‑HSPt复合终止子组成。本发明的ePE2‑OsMLHdn引导编辑系统不仅大大提高了编辑靶点的编辑效率,并能获得纯合突变植株,具有很好的应用前景。

    一种宽窗口单碱基编辑基因及其应用和育种方法

    公开(公告)号:CN110878305B

    公开(公告)日:2022-04-12

    申请号:CN201911249683.3

    申请日:2019-12-09

    Abstract: 本发明提供了一种单碱基编辑系统OsSpCas9‑eCDA及其应用和育种方法。本发明通过大量的实验,尝试采用不同的方式对SpCas9‑ABE进行改造,终于成功获得了一个高单碱基编辑效率、宽窗口的CP1249‑OsSpCas9‑eABE编辑器。并且本发明还提供了包含该CP1249‑OsSpCas9‑eABE基因的表达盒和一种表达载体,以及该表达盒和表达载体在水稻基因编辑方面的应用。本发明利用设计的CP1249‑OsSpCas9‑eABE基因构建植物表达载体,进而构建水稻打靶载体,导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的单碱基替换,特别是实现由A/T碱基突变成C/G。利用该编辑器进行水稻基因编辑,可以编辑更多的突变体,获得更多的随机突变或者得到突变更多的突变体库。

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