本发明涉及一种含中药小分子的干细胞无血清培养基及其制备方法。所述培养基包括如下原料：重组人胰岛素、维生素C、重组人转铁蛋白、人血清白蛋白、重组人纤连蛋白、人表皮生长因子EGF、人碱性成纤维生长因子bFGF、血小板衍生生长因子PDGF‑BB、灯盏花乙素、人参皂苷Rg3、黄芩苷、丹酚酸B和黄连素。所述培养基包括细胞所需的营养因子和人源促生长小分子，无异源蛋白，可以提供维持细胞生长和增殖的良好环境。通过添加灯盏花乙素，人参皂苷Rg3，黄芩苷，丹酚酸B和黄连素这五种中药小分子，能够显著提高间充质干细胞的贴壁，促进细胞增殖速率，维持细胞表面表型和细胞多项分化潜能，并能够较好保护干细胞。