本发明公开了一种高活性酮基泛解酸内酯还原酶突变体及其编码基因和应用。本发明公开的酮基泛解酸内酯还原酶突变体相对于SEQ ID NO:1所示的野生型酮基泛解酸内酯还原酶CviCPR，在第126位氨基酸残基和/或第215位氨基酸残基具有以下突变：第126位亮氨酸L突变为脯氨酸P、苯丙氨酸F、酪氨酸Y和色氨酸W中的一种；第215位丙氨酸A突变为天冬氨酸D和谷氨酸E中的一种。本发明提供的酮基泛解酸内酯还原酶突变体可高活性、高立体选择性地催化酮基泛解酸内酯制备D‑泛解酸内酯，为生物酶法不对称还原路线制备D‑泛解酸内酯的工业化生产提供一个潜在的高效生物催化剂。