一种重组大肠杆菌利用葡萄糖发酵生产D‑阿洛糖的方法，以E.coli JM109(DE3)为宿主，通过引入pgi、rpiB、alsE、a6PP基因，构建从葡萄糖到D‑阿洛糖的生物合成途径；随后，通过敲除UDP‑葡萄糖‑4‑差向异构酶基因galE，阻断副产物途径。在此基础上，敲除D‑阿洛糖特异性转运蛋白基因alsABC和D‑阿洛糖激酶基因alsK，阻断D‑阿洛糖的胞内代谢；最后，敲除磷酸戊糖途径中的葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶基因zwf以及糖酵解途径中的6‑磷酸果糖激酶基因pfkA，调节细胞的碳通量。通过上述技术手段，得到细胞工厂E.coli(Pgi,RpiB,AlsE,A6PP,ΔGalE,ΔAlsABC,ΔAlsK,ΔZwf,ΔPfkA)进行发酵，最终实现D‑阿洛糖的生物制备并且使其产量达到0.86g/L。