本发明属于单克隆抗体技术领域，具体涉及一种鼠抗乌鳢IgM单克隆抗体、杂交瘤细胞株及应用，所述鼠抗乌鳢IgM单克隆抗体重链可变区的CDR区包含如SEQ ID NO.1～3所示三个序列，轻链可变区的CDR区包含如SEQ ID NO.4～6所示三个序列；由保藏编号为CCTCC NO：C2023234的杂交瘤细胞株分泌所得。本发明提供的鼠抗乌鳢IgM单克隆抗体可用于Western blot和ELISA特异性检测乌鳢分泌形式的IgM，并可用于流式细胞术识别乌鳢IgM+B细胞。该单克隆抗体特异性好、灵敏度高、亲和力强，为乌鳢免疫系统的深入研究和以抗体水平为指标的疫苗免疫效果评价方法的建立奠定了基础。