公开(公告)号：CN101117634A

公开(公告)日：2008-02-06

申请号：CN200710052665.7

申请日：2007-07-09

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 张献龙 ,  金双侠 ,  刘小云 ,  刘冠泽 ,  唐文鑫 ,  聂以春 ,  郭小平

IPC: C12N15/10 ,  C12N15/29

Abstract: 本发明属于棉花基因工程技术领域，具体涉及一种分离棉花叶绿体DNA的新方法。包括：以幼嫩的叶片为材料，用普通家用榨汁机将叶片充分匀浆，利用A、B、C、D四种缓冲溶液，常规速度离心，依次通过完整叶绿体的分离，裂解及叶绿体DNA(cpDNA)分离纯化三个连续步骤，最终获得棉花叶绿体DNA纯品。本发明制备分离的叶绿体DNA质量较高，紫外分光光度计检测表明，本发明制备的DNA样品的D260nm/D280nm在1.6－1.8之间；产率高达1－10μg cpDNA/g叶片样品。经过验证，以分离的cpDNA为模板完全能够满足特异性酶切、RAPD、PCR和目标基因序列的克隆等常规分子生物学操作的需要。与现有技术相比，本发明不需要超高速离心机，也不需要通过蔗糖密度梯度离心分离等设备和步骤。