公开(公告)号：KR101044634B1

公开(公告)日：2011-06-29

申请号：KR1020090009458

申请日：2009-02-05

Applicant: 국민대학교산학협력단

Inventor： 유연규 ,  최경아 ,  박성준

IPC: G01N33/88 ,  G01N33/573

Abstract: 본 발명은 프로스타글란딘 H2(prostaglandin H2; PGH2)의 안정화 방법 및 프로스타글란딘 합성효소(mPGES-1)의 활성 측정방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 PGH2의 퍼옥시기(peroxy group)가 수산기(hydroxy group)로 분해되어 프로스타글란딘 F2(prostaglandin F
2 ; PGF2)로 전환되는 것을 막기 위하여, 프로스타글란딘 H2 기질에 포스포몰리브딕 산(phosphomolybdic acid ; PMA)을 첨가하는 프로스타글란딘 H2(PGH2)의 안정화 방법 및 이 PGH2 기질에 포스포몰리브딕 산(PMA) 및 프로스타글란딘 디하이드로게나제(15-PGDH)와 mPGES-1 두 종류의 효소의 이중 효소 활성 측정을 이용한 프로스타글란딘 합성효소(mPGES-1)의 활성 측정방법에 관한 것이다. 본 발명의 mPGES-1의 활성 측정방법은 종래의 염화주석(Tin chloride; SnCl
2 )을 사용해야 하는 불편이 없을 뿐만 아니라 반응 생성물인 PGE2를 정량하기 위하여 고가의 항체를 이용하지 않고도 UV-vis 영역에서 흡광도로 mPGES-1의 활성을 용이하게 측정할 수 있다. 따라서, 본 발명은 항염증 치료제 개발의 표적 단백질인 mPGES-1의 활성 억제물질을 대량으로 검색하는데 필요한 효과적이고 저비용의 mPGES-1의 활성 측정방법을 제공한다.
항염증 질환, PGH2, PGE2, mPGES-1, 포스포몰리브딕 산

公开(公告)号：KR1020100090145A

公开(公告)日：2010-08-13

申请号：KR1020090009458

申请日：2009-02-05

Applicant: 국민대학교산학협력단

Inventor： 유연규 ,  최경아 ,  박성준

IPC: G01N33/88 ,  G01N33/573

Abstract: PURPOSE: A method for measuring activation of prostaglandin synthetase(mPGES-1) activation is provided to improve convenience of measurement without expensive antibody. CONSTITUTION: A method for stabilizing PGH2 using phosphomolybdic acid(PMA) suppresses conversion of peroxy group of PGH2 to prostaglandin F2(PGF2). The concentration ratio of PGH2 and PMA is 1:1-100. The activation of mPGES-1 activation is measured by double enzyme activation measurement using PMA, prostaglandin dihydrogenase(15-PGDH) and prostaglandin synthetase(mPGES-1). A method for measuring mPGES-1 activation comprises: a step of stabilizing PGH2 substrate by reacting PMA with PGH2 substrate; a step of reacting mPGES-1 enzyme with the stabilized PGH2 to obtain PGE2; a step of reacting 15-PGDH enzyme and NAD+(nicotinamide adenine dinucleotide) to PGE to obtain 15-keto-PGE2 and NADH(1,4-dihydronicotinamide adenine dinucleotide); and a step of measuring fluorescence of NADH.

Abstract translation: 目的：提供一种测量前列腺素合成酶（mPGES-1）活化激活的方法，以提高测量的便利性，而无需昂贵的抗体。 构成：使用磷钼酸（PMA）稳定PGH2的方法抑制PGH2过氧基转化为前列腺素F2（PGF2）。 PGH2和PMA的浓度比为1：1-100。 通过使用PMA，前列腺素二氢化酶（15-PGDH）和前列腺素合成酶（mPGES-1）的双酶活化测量来测量mPGES-1活化的活化。 一种测量mPGES-1活化的方法包括：通过使PMA与PGH2底物反应来稳定PGH2底物的步骤; 使mPGES-1酶与稳定的PGH2反应获得PGE2的步骤; 将15-PGDH酶和NAD +（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）与PGE反应以获得15-酮-PAGE和NADH（1,4-二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）的步骤; 以及测量NADH荧光的步骤。